液态活检技术及其临床应用教材教学课件.pptx

讲者介绍应建明，博士，中国医学科学院肿瘤医院病理科副主任，硕士研究生导师。1998年和2000年分别获得北京医科大学医学学士和硕士学位，2007年获得香港中文大学医学博士学位。 2000年起在中国医学科学院肿瘤医院病理科从事肿瘤病理诊断，并负责肿瘤分子病理检测。2012年获北京市优秀中青年医师，现为中华医学会病理学分会及中国抗癌协会肿瘤病理专业委员会青委会副主任委员，中国抗癌协会淋巴瘤专业委员会青年委员。《中华病理学杂志》编委。已发表专业论文60余篇。液态活检技术及其临床应用应建明 中国医学科学院肿瘤医院jmying@cicams.ac.cn传统的肿瘤诊断技术病理组织检查 （HE，IHC）血清标志物检测 （CEA,PSA)病理检验诊断分子病理检测 （FISH, RT-PCR, NGS）传统肿瘤诊断技术 超声波检测（B超）X射线断层扫描术（XRAY,CT）影像学检测核磁共振成像（MRI）正电子成像术（PET-CT）内窥镜（Endoscope）传统的肿瘤诊断存在的问题早期筛查：标记物不统一, 方法不够灵敏或是特异性不足。临床诊断: 影像学：较灵敏，特异性不足，对病灶大小有要求。病理学：金标准，但是需要组织样本，取样会带来创伤和扩散风险，很多晚期患者无法取样或取样不足。治疗/复发转移监测：影像学：结果普遍存在滞后性。血清标志物：较灵敏，但是特异性不足；有些类型癌症没有合适的血清标志物。2015年十大突破技术--液态活检技术MIT Technology Review杂志发布了2015年度十大突破技术(10 Breakthrough Technologies 2015)的榜单。液态活检技术光荣上榜。液态活检：快速、简便、无痛苦、无创伤的癌症血液检测方法传统而又崭新的检测技术--“液态活检”“液态活检”的定义： A liquid biopsy is a liquid biomarker that can be easily isolated from many body fluids blood, saliva, urine, ascites, pleural effusion, etc.) and, as well as a tissue biopsy, a representative of the tissue from which it is spread. -- Christian Rolfo, Biochimica et Biophysica Acta, 2013.“液态活检”的标记物CTCsctDNA(cfDNA)主要指来自于抗凝的外周血全血，完整的肿瘤细胞主要指来自于抗凝血外周血的血浆，片段化的DNA片段一般认为来源于肿瘤原发灶/转移灶肿瘤瘤细胞凋亡/坏死释放的DNA片段活细胞，一般不宜长期保存提取纯化后的核酸，可以保存可以用于细胞学形态、结构分析；也可以分析细胞DNA、RNA、蛋白质等各类标志物一般用于DNA突变监测、甲基化等DNA修饰相关分析用于病情评价、预后判断，肿瘤早期诊断潜力不明确用于个体化治疗，肿瘤早期诊断潜力相对明确还有miRNAs，Peptides， Exosomes（外泌体），Secretomes（分泌物质组）等。什么是ctDNA ? ctDNA（circulating tumor DNA），即循环肿瘤DNA，从字面意思来讲，指的是由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA。但是在了解ctDNA之前，我们要知道另一个与之相关的概念——cfDNA。 cfDNA（cell-free DNA），或者叫血浆游离DNA，是血浆中游离存在的DNA，它们有的来自于正常细胞，有的来自于异常细胞（如肿瘤细胞），还有部分来自于我们外部（如病毒DNA）。 来源：1、来自于坏死的肿瘤细胞2、来自于凋亡的肿瘤细胞3、来自于肿瘤细胞分泌的外排物利用NSCLC癌患者血浆中的ctDNA检测EGFR突变检测9名接受特罗凯一线治疗的NSCLC患者血浆中ctDNA的EGFR突变情况，一直到患者进展至PD。在接受治疗后，所有患者血浆中的含有EGFR突变的ctDNA浓度出现下降，其中8人的EGFR突变完全消失。有6名患者的血浆中重新检测到EGFR突变的时间要比进展至PD的时间早4个月以上！随着治疗，所有9名患者的血浆中均检出一定量T790M突变。血浆中没有检测到EGFR的3名患者，进展至PD期时，其肿瘤仅在胸腔内有缓慢进展。现有技术用石蜡组织切片样本只能检测60copies以上的突变含量，但是用液态活检通过数字PCR平台却可以检测0-60copies之间的突变含量，更早的发现病情及耐药性，对于癌症患者如果能提前4个月发现病情的变化，生存率会大大提高。-- Clin Cancer Res, 2014, march著名的JohnsHopkins大学