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革兰染色(Gram stain) 1884年由丹麦医师Gram创立。 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床上具有非常重要的意义。 目的： 掌握细菌涂片的制备及革兰染色的方法 G+ 菌 细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度高， 经革兰氏染色后能够将龙胆紫与碘的复合物牢固留 在壁内。脂质含量少，不容易被脱色液脱色而呈现 紫蓝色。 G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度低，含 大量脂质，易被脱除染料。 原理： 革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构比较 器材和试剂： 1.菌种 白色葡萄球菌和大肠杆菌培养物 2.试剂 革兰染色液 及其成分 龙胆紫液 龙胆紫、乙醇 碘溶液 碘、碘化钾 脱色液 丙酮、乙醇 沙黄溶液 沙黄、乙醇 3.其它材料 接种环 载玻片 染色盘 洗液瓶 酒精灯等 冲洗 染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果 方法与步骤 1.细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2.染色 ①龙胆紫液 ②碘液 ③脱色液 ④沙黄溶液复染 吸水纸吸干 10s 10s 10~20s 10s 冲洗，甩干 冲洗，甩干 冲洗，甩干 10s 10s 10-20s 10s G+菌 G-菌 龙胆紫 碘液 丙酮、乙醇 沙黄溶液 ① ② ③ ④复染 结果 大肠杆菌（1000倍）革兰阴性 白色葡萄球菌（1000倍）革兰阳性 无菌操作（接种环灭菌和取菌） 涂片的厚度要适中 染色的时间控制 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗 观察后将玻片放入玻片缸中 注意事项 意 义 1.鉴别细菌 2.研究与致病性的关系 3.指导临床用药 G+ G- G+ 致病 外毒素 G- 致病 内毒素 G+ 青霉素、头孢菌素等 G- 链霉素、庆大霉素等 细菌的特殊结构（示教） 从细胞质的基础颗粒长出，伸到细胞外面的细长呈波状弯曲的丝状物。 功能：鞭毛运动可鉴定、与致病性有关、具有抗原性（H抗原） 鞭 毛 荚膜 细菌细胞壁外包绕的一层粘液性物质，厚度≥0.2μm边界明显者称为荚膜，厚度＜0.2μm者称为微荚膜 功能：荚膜护菌强致病---抗吞噬作用、抗有害物质损伤、抗干燥作用、黏附作用 菌体内部物质缩水（60％）形成圆或卵圆形小体。 功能：芽胞形态辨细菌， 灭菌标准抗力强。 芽 胞 1.寻找视野：在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观 察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。 2.增大光照强度：将聚光器上升到最高位置，光圈开到最 大。 3.转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头：转动转换器，使高 倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏 油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视 镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片 为宜。 油镜的使用方法 4.调试观察：观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。 如果不出现物象或者目标不理想要重新寻找，在加油区之外 重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按： 低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。 5.清洗镜头：油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上和标本上 的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯（或乙醚）擦去残余的香 柏油，最后再用干擦镜纸擦干净。 油镜的使用方法 物 镜 工作距离(mm) 低倍目镜 10× 5.40 高倍目镜 40× 0.39 油镜头 100× 0.11 预 习 1.请将实验后的玻片放入前面的消毒缸中。 2.离开实验室之前请用肥皂洗手。 分枝杆菌鉴定、消毒灭菌、肠道致病菌的分离培养 实验报告 1.革兰染色的材料 2.染色的方法步骤 3.结果 4.临床意义 到显微镜室借显微镜，每人一台。 医学微生物学实验一 新乡医学院微生物学教研室：3029130