试验特殊显微镜结构及操作技术 中国显微图像网.ppt

10. 更换样品 利用显微镜主体上的“物镜再聚焦定位环”，照明器上的“倾斜装置”，“聚光器再聚焦指紧螺钉，可容易更换样品。 11. 显微镜操作结束后 1) 关闭电源开关(开关拨至O) 2) 灯室冷却后，把显微镜上的聚乙烯防尘罩盖好。 相差（PH）显微术 观察透明细胞或其他透明样品，需配相衬聚光器、相衬物镜、相衬环等附件。相衬板将衍射光推迟1/4波长，振幅相减，样品暗，背景亮，称正反差或暗反差，分正低（DL）、正低低（DLL）和中型暗相差（DM）。折光率较强的样品用后者。相衬板将直射光推迟1/4波长，振幅相加，样品亮，背景暗，称负反差或明反差，分负中（NM）和负高（NH）。折光率较小的样品用后者。 关键点：将有ph 标记的物镜与物镜相同ph 标记的聚光器模块一起送入光路，在进行显微术前，校正(对中)物镜里的相差板及聚光器模块里的环形光阑。 1. 用明视场（BF）显微术对样品聚焦。2. 相差观察时对显微镜的调整。 1) 将ph 物镜转入光路。 2) 转动“聚光器转盘”，使其与在光路中的物镜(步骤1中所安置的)具有相同的ph 标记。 3) 向右转动聚光器上的“孔径光阑调节杆”，完全打开孔径光阑。 3. 对中环形光阑 1) 把“目镜筒转盘”设到B位置，转动勃氏镜聚焦螺钉，使环形光阑像清晰。 2) 用六角起子转动聚光器模块中的两个“环形光阑对中螺钉”，使环形光阑像与物镜中的相差板环形像同心。 3) 把目镜筒转盘位置再转到O上。调中心手轮 4. 进行观察 1) 把聚光器“孔径光阑”完全打开。 2) 移动透射照明器上的“视场光阑调节杆”，使视场光阑像大小与视场大小接近。 3) 把透射照明器上的“NCB11 滤色片”从光路中移开，把“GIF 滤色片”移进光路。(提高反差) 4) 可通过把“ND 滤色片”移进或移出光路来调节视场亮度。 5. 使用不同放大倍数的物镜进行观察 1) 把所需放大倍数的相差物镜移入光路。 2) 转动“聚光器转盘”，使其与在光路上物镜（步骤1中所安置的）具有相同的ph 标记。 3) 调节放入光路中的环形光阑中心。(见程序3) 6. 更换样品 利用使用显微镜主机上的“物镜再聚焦定位环”，透射照明器上的“倾斜”装置及“聚光器再聚焦指紧螺钉”，可容易更换样品。 7. 显微镜操作结束后与明视场显微术步骤相同。 微分干涉（DIC）显微术 可观察到样品的立体感，适用于显微操纵等，彩色图像。因塑料培养皿的不均衡张力在DIC下呈现干涉条纹、DIC不宜用于普遍使用的塑料培养皿。DIC的光通亮大，可用到100倍物镜。需配DIC聚光器等附件，使用明场物镜。 1．用明场找到视野 2．压入起偏器，选择相应模块 3．调节孔径光栅至最佳效果。 荧光（E）显微术 适用于本身属于或被染色后形成荧光体的样品。荧光体在一定波长光（紫外或可见）的激发下发光（即荧光，波长长于激发光）。需配荧光附件和滤光器等。前者主件为激发光源，一般分汞灯系统和卤灯系统，汞灯既适用于紫外光激发也适用于可见光激发，且能量较高；后者只适用于可见光激发。（此处插入拍摄图片） 1. 操作之前要求： （1）检查荧光装置的工作时间，如荧光灯的工作时间超过使用寿命，应予以更换。 （2）使用物荧光载波片 （3）每次使用之间必须间隔20分钟。 2. 用明场找到视野。 3. 关闭明场光源，打开荧光电源预热5分钟。 4. 开启荧光盘，并根据要求选择荧光通道。 5. 激发荧光发生器，打开光闸，即可进行观察。 实验1 特殊显微镜结构及操作技术 【目的】 了解TE2000-U型倒置显微镜的基本组件、原理，掌握其基本操作。 【材料】 1．高等动、植物各类组织永久制片； 2．培养皿（瓶）中的活细胞或微生物； 3．口腔上皮细胞的临时装片。 【实验用品】 1．试剂：10μg/mL罗丹明123的磷酸缓冲液（PBS）荧光染料。 2．器材：倒置显微镜，相差显微镜附件（相差物镜、转盘聚光器、对中环形光阑和绿色滤色镜等），微分干涉显微镜附件（起偏镜、检偏镜和渥拉斯顿棱镜等），荧光显微镜附件（荧光发射器、激发滤片和阻断滤片等），载玻片，盖玻片，牙签，滤纸条，擦镜纸，镊子，滴管。 【实验原理和方法】 倒置显微镜是一种用于生物组织细胞离体培养观察的光学显微装置，能直接对培养皿、培养瓶的标本进行显微观察。由于它的物镜、物体和光源位置刚好与立式显微镜颠倒，被称为倒置显微镜。倒置显微镜的物镜在下，聚光器在上，被观察样品置于位于上方的聚光器之下，聚光器具有远大于物镜的工作距离。因此，适应于培养皿或培养瓶中样品的观察。高档倒置显微镜可根据不同观察要求，增加相差、微分干涉反差物镜或荧光发射装置，构建成相差显微镜、微分干涉显微镜或荧光显微镜。 一、倒置显微镜的构造与使用 （