第二章2_鉴别__薄层色谱法.ppt

第二章 中药制剂的鉴别第二节 理化鉴别三、色谱法 --------------薄层色谱法 薄层色谱法在中药制剂的定性鉴别中得到广泛的应用，这主要是由于其具有分离分析双重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属性，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。 中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。 1.薄层色谱法定性的基础 基于相同物质在同一色谱条件下，表现出相同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。 * * 2.特点 简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功能，且采用共薄层对照分析法，故专属性亦较强。 三、系统适用性试验(05版药典新增) 1.检测灵敏度 主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品溶液与稀释若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。 2.分离度 用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点，应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外，分离度应大于1.0。 分离度（R）的计算公式为： R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离； d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1及W2为相邻两峰各自的峰宽。 A B W1 W2 d1 d2 3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择 对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单体，也包括对照提取物）和对照药材两种。 对照物的设置有以下四种方式： 1.对照品对照： 用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制成对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一颜色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置一种或数种对照品。 2.对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用 四、对照物的选择 3.对照品和对照药材同时对照(“双对照”) 为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。 例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照药材进行检视。 要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品是否使用了假冒药材。 4.阴阳对照 由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行鉴别。 阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制成该味药的阳性对照液。 阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材，剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制成该味药的阴性对照液。 通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。 实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19 五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面： 1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以辨认，因此供试液的净化程度就很关键。 为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。 2.薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要来源。 3.吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱