卵黄抗体生产及应用技术概要.ppt

卵黄抗体生产及应用技术进展 李建涛 2003年6月 内容 一、生产技术 二、应用技术 三、问题及展望 一、 生产技术 (一) IgY产生过程 (二) IgY转移时间、产量及影响产量的因素 (三）IgY结构特点 (四) IgY相对与IgG的优势 (五) IgY纯化、活性测定及保存 (一) IgY产生过程 (二) IgY转移时间、产量及影响产量的因  素 续（2） 续（3） （三）IgY结构特点 续（1） （四） IgY相对IgG的优势 续（1） （五）IgY纯化、活性测定及保存 续（1） 续（2） 二、 IgY应用技术 IgY上述优势及其对病原菌感染的防御无动物种属差 异使其在传染病的预防、诊断及治疗、免疫抗体监测、 免疫分析、酶联分析以及做为功能食品因子和抗生素替 代品都很有用，特别是用鸡高免卵黄抗体防治其他动物 和人的肠道疾病。 内容 （一）在家禽中的应用 （二）在水产养殖中的应用 （三）IgY对仔猪和犊牛腹泻的防治 续（1） （四）IgY在奶牛上的应用 （五）IgY在人医上的应用 续（1） 三、问题及展望 1.现代免疫技术、必威体育精装版生化分离技术、鸡蛋的工业化加工综合利用技术相结合生产卵黄抗体是解决我国鸡蛋生产供大于求、提高蛋鸡附加值有效措施。 2.IgY作为一种经济有效的生产多克隆抗体（PcAb）的方法，多种病毒、霉形体、棘球绦虫、酶、激素、Ig、动物毒素等的特异性IgY已成功制备（罗函禄，1997）。 3.经济、高效的分离纯化技术是关键。 4.缺点及需要解决的问题。 5.发展趋势。 * * 1.腔上囊是禽类特有的控制体液免疫的淋巴器官； 2.腔上囊中B细胞受到抗原刺激后分化成浆细胞，后者 分泌抗体进入血液； 3.通过血液循环和输卵管上皮层分泌滤泡，产蛋鸡将母 源抗体选择性分泌到卵黄内； 4.卵黄中Ig主要是IgG，叫IgY（IgM和IgA转移到蛋清中）； 5.小鸡通过IgY实现获得性被动免疫(猪、牛、马属通过初乳；兔通过胎盘)； 6.卵黄中含有多种不同抗体（约200种，滴度取决于暴露程度；M.Coleman,2000)； 7.用某种病原菌免疫母鸡，可产生特异性IgY， Sugita等（1996）用26种甲醛灭活病原菌免疫产蛋鸡，IgY 可预防多种疾病。 1.用HI、ELISA、ID检查卵黄中IgY，抗体应答形成时间 晚于血清1～2周（Theresa H P,1985；鸭腺病毒），以后与血清测得的HI滴度一致，也有报道卵黄卵黄抗体具有累积作用； 2.经加强免疫，卵黄中特异性IgY效价能维持数月奶至1年； 3.一个卵黄约含100～400 mgIgY，一只产蛋鸡每年可获 得40～50gIgY（D .Carlander,2002），相当与30只家兔同期内血清IgG 产量； 4.卵黄中抗原特异性抗体数量占IgY平均10%，范围是5%（抗胰岛素抗体）～28%（抗鼠IgG抗体），取决于免疫个体、免疫程序及抗原的免疫原性； 5.影响IgY产量的因素包括： （1）抗原的质与量（颗粒/可溶性抗原、类毒素/菌体抗原、活菌/死菌，免疫麻痹；高免疫原性和安全） （2）机体方面，A包括产蛋鸡品种（来航鸡、洛岛红鸡及其杂交后代的特异性IgY最高平均浓度有显著差异（D Carlander,2002)、B产蛋率和产蛋间歇与IgY浓度、C蛋重及卵黄重、D营养影响免疫系统发育、免疫机能状况和生产性能、E健康状况（SPF鸡群，起码应无免疫抑制性疾病和垂直传播性疾病，对父母代IBD的免疫） （3）免疫途径、免疫程序、佐剂 6.生产卵黄抗体典型的免疫程序（Li-Chan等，2000）： (1)首免，胸肌注射0.5～1mg/羽弗氏完全佐剂等体积乳化抗原； (2)首免后第3、5、7和25周用弗氏不完全佐剂乳化抗原进行2～4次加强免疫，剂量逐步放大1～2倍。这种多次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫的过程，称之为“超免疫作用”。 1.分子量160～180kDa，稍大于IgG（ 160kDa ）； 2.多一稳定区而少一铰链区（铰链区有较多脯氨酸，具有韧性，与抗体分子构型变化有关）； 这种差异没有影响IgY的抗原-抗体结合特性和结合能力，结合价也是2（Warr等, 1995），然而对于pH、温度及蛋白水解等引起构象变化的环境条件，IgY比IgG稳定； 由于缺乏铰链区，两个抗原结合片段（Fab）紧密排列，使IgY缺少韧性及功能种类，在确定条件下沉淀及聚合反应能力降低（Warr等，1995），这使其具有抵抗幼龄动物胃酸屏障的能力。 3.IgY能介导过敏反应，与哺乳动物的IgE相似。 1.高度保守的哺乳动物蛋白质对禽有较强