[医学]淋转试验.ppt

T淋巴细胞转化试验 (T lymphocyte transformation test) 中山医学院免疫学教研室 2011-04 实验目的和要求 掌握T淋巴细胞转化实验的原理 掌握细胞计数的方法 熟悉能引起T淋巴细胞发生转化 的常用抗原性物质及其特点 实 验 原 理 DNA合成 分化 淋巴母细胞 刺激物 细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松 T淋巴细胞 未转化细胞 过渡态细胞 淋巴母细胞 体外刺激物种类 非特异抗原刺激物：如PHA、ConA等 特异性抗原刺激物：如PPD 细胞抗原和抗淋巴细胞抗体：如同种 白细胞、抗淋巴细胞血清等 实 验 方 案 细胞培养: 外周血分离的单个核细胞与 植物血凝素(PHA)混合体外培养3天 观察细胞形态变化: 部分T细胞转化为淋巴 母细胞，部分可见核有丝分裂现象 判定T 淋巴细胞转化率（%） 实 验 材 料 肝素抗凝血 Hank’s液 淋巴细胞分层液 PHA 细胞计数板 显微镜 操 作 步 骤 淋巴细胞的分离 用Hank’s液配成1×106 细胞/ml的淋巴细胞悬液。 加PHA 5ug/ml 分别加入24孔细胞培养板，培养72小时 离心：1000rpm 10分钟 弃上清，用残液将沉淀细胞混匀配成悬液 推片，姬姆萨染色，油镜观察 阴性对照：不加PHA 结 果 观 察 转化细胞： 淋巴母细胞： 体积大，核膜清楚，染色质疏松呈细 网状，核/细胞比例变小。 过渡型淋巴细胞：类似母细胞。 核丝分裂相细胞：核体呈现有丝分裂，胞内可见组织染色体。 未转化细胞： 成熟小淋巴细胞：体积小，核染色体致密，核/细胞比例大。 衰老退化细胞：胞浆部分或全部破碎（不计数） 未转化细胞 转化细胞 转化和未转化细胞特征 细胞类别 转化细胞 未转化细胞 母细胞 过渡型 细胞体积（um） ≥12-20 12-16 6-8 细胞 大小 染色质 核仁 有丝分裂 增大 疏松 1-4个 +或- 增大 疏松 有或无 - 不增大 密集 无 - 胞浆 增色 着色 空泡 伪足 ++ 嗜碱 +或- +或- + 嗜碱 +或- +或- - 天青色 - - 正常成熟淋巴细胞 转化为淋巴母细胞 核丝分裂相细胞