论文资料-实验八 微生物的分离纯化与平板菌落计数(二).ppt

实验八 微生物的分离纯化与平板菌落计数（二） 一、目的要求 ? 1. 了解分离与纯化微生物的基本原理及方法。 ??2. 掌握倒平板的方法和平板划线分离的基本操作技术。 二、基本原理? 由于在自然界中的微生物是各种类微生物的混合体，因此，为了研究某微生物的特性，或者要大量地培养和利用某微生物，必须把它们这些混杂的微生物群中分离出来。从而获得某一菌株的纯培养。这种获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。 为了获得某微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养，酸碱度，氧等条件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其它杂菌，再通过各种稀释法（平板稀释法，平板划线法等），使它们在固体培养基上形成单菌落，从而得到纯菌株。 三、器材? 肉汤蛋白胨培养基；伊红美兰培养基。 ?盛9毫升无菌水的试管；无菌吸管；无菌培养皿；样品等。 四、操作步骤? 1. 平板菌落记数法（又称倾注法）： ????（1）制备稀释液：用1毫升无菌吸管吸取一毫升样品注入盛有9毫升无菌水的试管中，吹吸三次，并振摇使之充分混匀。然后再用一支吸管从此试管中吸取一毫升注入另一盛有9毫升无菌水的试管中，以次类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6……的各种稀释度的土壤溶液。  （2）滴加菌液：0.1ml （3）倒培养基：牛肉膏蛋白胨培养基熔化后冷却至45oC,倒入每付平板约15-20 ml （4）培养：倒置37℃培养24-48h （5）记数： ?2.平板划线分离法： （1）倒平板:伊红美兰培养基熔化后冷却到60度倒入无菌培养皿,每组4皿 （2）划线：划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成分散的单个菌落。 接种环取菌液划线,每位同学1付  平板划线法 (3)培养:平板倒置于37 ℃ ,培养24-48h （4）挑菌：挑取紫黑色带金属光泽的单菌落接入斜面试管(每人1支标记备用)。 EMB agar 五、结果与思考? ?1.在平板划线法中，为什么每次都需要将接种环上剩余物烧掉？ ???2.为什么要把培养皿倒置培养？ ??? 配微生物生理生化反应用培养基 1-2组配糖发酵培养基300 ml，分装30支试管，每支内倒放小指管1支。 3-4组配吲哚培养基300 ml，分装30支试管。 5-6组配产H2S培养基300 ml，分装30支试管。 7-8组配甲基红试验培养基200ml，分装30支试管。 9-10组配淀粉水解试验培养基300ml，装入5只三角瓶。包培养皿20付。 培养基配方 1.糖发酵试验 蛋白胨水培养基1000ML 、葡萄糖10g, PH7.4-7.6 加1.6%溴甲酚紫1—2ml， 0.7kg/cm2 (115度) 灭菌20min 2. 产H2S 试验 蛋白胨20g. NaCl 5g, 琼脂 20g ， 柠檬酸铁 0.5 g ，硫代硫酸钠 0.5 g ，水 1000ml , PH 7.2 ,121.C , 15 min 3.蛋白胨水MD（吲哚试验） 蛋白胨10g。 NaCl 5 g ，水 1000ml， PH 7.6 ，121度 灭菌20min 4．淀粉MD 蛋白胨10g NaCL 5g， 牛肉膏5g ， 可溶性淀粉 2g， 水1000ml 琼脂 15—20g ，121度， 灭菌30min 5．葡萄糖蛋白胨水MD （甲基红、V.P试验） 蛋白胨 5g 葡萄糖5 g ， K2HPO4 2g ， 水1000ml ， PH 7.0-7.4，121度，灭菌30min * * 1.dilute sample 1 ml 9 ml 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 2. plate out 0.1 ml *