狂犬病固定毒Vero细胞适应株的建立.PDF

维普资讯 ★●拳 志 粤．1·¨ Tif●l_‘●‘● Jtale6 285 狂犬病固定毒 Vero细胞适应株的建立 曾蓉芳 陈阿根 张 瑛 黄海武 (卫生部上海生曲捌品研究所 病毒研究宣．上海 20006Z) 提 要 车文报道狂犬病毒 Veto细胞适应株建株经过以爱对适应株的抗原和免疫原性分析的 情况 ，井推荐 ’RFD 和 。Hs。 适应株作为狂犬疫苗徽藏体培养系统的候选毒株。 荧■调：托犬面定毒 V。ro细胞 适应传代 最近数年来，WHO巳批准使用 Veto细胞进行大规模的疫苗制备。法国和荷兰巳正 式采用此种传代细胞进行狂犬病疫苗的工业化生产 “ 。此生产系统用微载体培养 Vero 细胞，产量大，质量高，比人二倍体疫苗价格低 。因此，比较容易被第三世界人民所接 受[．。我国近数年来农村养翔成风，巳达二亿只之多，每年被翔等动物咬伤的人数高达500 万，而国内生产的组织培养疫苗系用手工业式的工艺和以原代地鼠肾为原科，故其产量和 质量远远不能满足实际的疫情需求。为了克服这种被动局面，我们决定以Vero细胞微载 体系统进行狂犬病疫苗的工业化生产。本文旨在培植能适应于Vero细胞的疫苗生产 毒 种。现将新适直株的培植和鉴定情况报道如下t 材 料 与 方 法 1． Vero蜘奠椿： 自加拿大法 比埃研究所射进的疫苗生产用细胞株。 2． 试 ■用的狂太■暇毫●：。tG 株—— 国内现行狂犬病组织培养疫苗的生产毒种。 LEP 株—— 引进 的狂犬病毒鸡胚适应株 ·此二毒种作为亲本株用于 Vero细胞适应传代。 C‘VS 株为国 际通用的标 准攻击毒，用于检定 。 j． 适应株曲培擅：以 。aG 和 LEP 毒种分别癌染 Veto细胞，置 37℃静止培养，定期检 测病毒繁殖动态。取其高峰船培养液连续在Vero细弛上传代 ，或以缚末稀释法克隆出较纯的子代 梅病 毒漪度选l01 ／m1以上时 (印达割国外同型原苗的病 毒滴度要求 )，便可将毒种冻干保存及做 一 系列检定。 ●． 嗣方洼 ： @用敢抗体夹心I，和反向间接 ELLSA法l-测病毒抗原和抗体。 @小 鼠脑内毒力测定法 (MT-LD 口)，中和试验 (MNT)，效力试验等均按 WHO出版 的狂 犬癌检测法进行I_JI】】。 @疫苗对动物诱生抗体溯定法参考 Rosmaoff等法进行l ¨】。 本文于1989年l2月1l甘牧到． t ：}旬建之 ·卢孝曾、焦永真荨教授对本工作培子j：力支持和帮助．张埂荆同志曾参加部分早期工庠 在此一并致谢． 维普资讯 286 病毒学痞}志 8，l●神 VIt●l●IiBI $ials● 结 、 果 一 、 适 应株的培植；Vero细胞单层感染 aG 和 “LEP 毒株后，每隔 4天检测上 清病毒含量，在开始 1— 3代传代的培养液中，病毒滴度 很低 (10 ／mJ)，其后， 病毒滴度逐渐上升，到20代左 右已达 10--65／mJ左右(MT法)。以ELISA法测其 抗原 量，结果类同。病毒在细胞上的潜伏 期也 由l2天逐渐缩短到 6— 7天，并保持相对稳定 (见表 1)。由 aG”和 “LEP”株传出的其他适应株为 “HSa”、 “EM。”和 “L” 株 ，经2O代左右适应传代之后 ，其滴度也与 WRF”株不相上下 (表 2 )。 裹 1 域直抹 RFD。在Veto衄■上的一虞 Table1VirusTite