HIV感染的血清学检测PPT.ppt

;内容;HIV抗体检测;HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查： 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验;HIV抗体试剂盒进展;HIV抗体筛查检测;筛查试剂要求;筛查方法： 常用的筛查方法是酶联免疫试验（ELISA） 快速检测（RT）及其它检测 (1)明胶颗粒凝集试验(PA) (2)斑点EIA或称斑点ELISA (dot-EIA) (3)斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验 (4)艾滋病唾液检测卡 尿液HIV抗体检测;一、酶联免疫试验：ELISA;包被抗原;（一）斑???EIA或称斑点ELISA（dot-EIA） 以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原量少。 ;（二）免疫胶体金（或胶体硒）快速试验 与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。 区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体金（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。 ;稳定，可室温长期保存。试验不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。 已有被SFDA批准注册的进口试剂和国内产品。一般可在10?30min内判读结果。;样品垫: 加入血浆,血清或全血样品.红细胞在此迁移过程中被去除 ; 撕下所需的测试纸条数,撕下表面保护膜;血清/血浆样品 加50ul样品于样品垫中;全血样品 加50ul样品于样品垫中 ;病人条; 注意事项; （三）艾滋病唾液检测卡 在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶免疫间接法。 主要检测唾液中的HIV IgA与IgG抗体，敏感性特异性与ELISA相近，可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。 以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法（WB）试剂已经美国FDA批准。;（四）明胶颗粒凝集试验（PA） PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。 PA试剂有两种，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFD HIV-1/2 PA），已经我国食品药品监督管理局（SFDA）注册批准；HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂（SERODIA-HIV-1/2）可初步区分HIV-1型和HIV-2型，目前我国尚未引进。; 尿液测定;快速试剂的应用;结果报告： 对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告。 对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。 复检试验： 对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。 如果两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。 对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告。;初筛试验呈阳性反应样品的转送： 填写“HIV抗体待复测送检单”，经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。 对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。 ;样　　本; 初筛试验结果的报告 ;对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告;;; HIV抗体检测确认试验 ;HIV抗体确认试验;蛋白印迹实验（WB） ——广泛使用的确认实验 基本原理 HIV全病毒抗原经过聚丙烯酰胺凝胶电泳,将分子量大小不等的HIV抗原蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。;将待检血清样品加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应,血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。 加入酶偶联的抗人IgG抗体和底物，即可使有反应的抗原-抗体结合带呈现紫褐色,根据出现