Ulk1避免乙醇诱发的神经元应激和认知相关的行为缺陷PPT.pptx

Ulk1避免乙醇诱发的神经元应激和认知相关的行为缺陷;引言;乙醇管理;定量聚合酶链反应（qPCR）;蛋白质印迹;行为测试;开放现场测试;新型对象识别测试;旋转棒;数据分析;结果; CIE30分钟后，Ulk1 mRNA水平瞬时上调（?1.7倍），随后下调，在8小时达到与对照相当的水平，然后在12小时进一步下调（图1B）。 在CIE后30分钟进行的qPCR在Bdnf中显示出1.2倍的增加（图1C）。 Fez1（一种编码由Ulk1激酶磷酸化的蛋白质的基因和另外的自噬相关基因（包括Ulk2，Gabarap，Lc3和p62）图1C），证明了对CIE响应的Ulk1 mRNA表达增加的特异性。;为了解决乙醇对Ulk1活性的影响，我们检测了Ser-555的Ulk1的磷酸化水平，其被5AMP激活的激酶（AMPK）磷酸化，并显示与Ulk1活性呈正相关。 乙醇首先被急性地用于解决乙醇暴露对这种磷酸化的直接和间接的影响。 虽然PFC中的Ulk1蛋白表达的总水平保持不变，但磷酸化Ser-555的水平显着下调（图2A）。 磷酸Ser-555的水平在CIE的4个周期后也下调（图2B）。 数据暗示乙醇暴露会使PFC中的Ulk1活性降低。 乙醇诱导的Ulk1活性降低可能导致大脑自噬活性下降。为了测试这种可能性，并且为了进一步解决Ulk1在乙醇诱导的自噬调节中的作用，我们评估了野生型（WT）和Ulk1-null的慢性乙醇处理（4x CIE）后PFC中p62蛋白的水平。因为p62作为自噬降解的靶标，p62积累被认为是体内减毒自噬的细胞标记，因此反映了细胞应激反应的一个征兆。在WT小鼠的PFC中，p62蛋白的水平被乙醇处理显着上调，并且在Ulk1转基因小鼠中加剧（图2C），证明慢性乙醇暴露和Ulk1的丧失协同减弱PFC中的自噬。 与抗CaMKII的共染色显示p62在PFC的锥体神经元中的显着积累，表明该细胞类型对乙醇诱导的神经元应激的主要脆弱性。 ;为了开始研究CIE暴露对PFC相关行为功能的影响，我们评估了WT和Ulk1-null小鼠在开放场箱中的自发性运动活动。 尽管两种基因型具有相同的总运动活动水平和不存在乙醇时的中心探查时间，但WT小鼠显示出降低的总运动活动水平，对中心探查时间无影响，而Ulk1转基因小鼠显示出显着的降低 CIE后的中心探索时间（图3A）。 数据表明乙醇暴露的组合效应和Ulk1活性的丧失在新的环境中表现出探索的低倾向，并表明乙醇能够诱导新奇寻找活动或Ulk1转基因小鼠中探索的动机的下降。 ;没有CIE，两种基因型都显示出与熟悉的对象区分新颖物体的同等能力。 在CIE之后，Ulk1-null小鼠特异性地显示识别新物体的能力下降（图3B） 进一步证明乙醇暴露与Ulk1相对于认知功能丧失之间的协同作用。 ;我们另外测试了WT和Ulk1-null小鼠的运动功能，使用rotarod，其评估主要依赖于小脑功能的运动协调和运动学习。 Ulk1-null小鼠显示与WT小鼠相似的运动功能，慢性乙醇暴露对两种基因型的运动功能没有显着影响（图3C）。;虽然Ulk1被鉴定为对CIE有显着影响的基因，但是Ulk1在调节乙醇饮酒行为中的作用仍有待测验。 我们通过向老鼠提供水和乙醇的选择来解决这个问题，以便在CIE的多个周期内自愿饮用（图4A）。 尽管WT小鼠在以前报道的反复CIE周期中表现出自愿乙醇饮酒的升高，但在CIE期间，Ulk1转基因小鼠没有显示乙醇饮酒升高的明显迹象（图4B）。 数据表明，Ulk1有助于调节自愿乙醇饮酒行为。 ;讨论;THANKS