(植物生理学实验)小实验3.ppt

实验意义 绿色植物的光合作用是在叶绿体中的叶绿体色素中进行的，了解叶绿体色素的组成、性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助。 实 验 原 理 1.1 叶绿素： 主要包括叶绿素a和b 分子式: Chla C55H72O5N4Mg Chlb C55H70O6N4Mg 结构式: 卟啉环化合物 四个吡咯环与四个=CH-组成一个大环,共轭双键形成一个大π键,环中央有一个镁原子,卟啉环决定叶绿素颜色,也是吸收可见光,并以诱导共振方式传递光能的根本所在,叶醇尾是由四个异戊二烯单位组成的双萜 脂溶性: 难溶于水,仅溶于酒精、丙酮、已醚、已烷等有机溶剂 卟啉环头部呈极性, 具亲水性; 叶醇尾部具亲脂性 类胡萝卜素 胡萝卜素 橙黄色 不溶于水 叶黄素 鲜黄色 溶于有机溶剂 叶绿素中的镁可以被氢离子所取代而成褐色的去镁叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。 下次课上课时间仍是下午1:30 敬请谅解! * 小 结 1.1 单位和负号 2.1 分析不同处理气孔开闭程度不同的原因. 2.2 结果 分析 结论  叶绿体色素及其理化性质 叶绿素的定量测定 与水混溶的有机溶剂：95％乙醇；80％丙酮 CaCO3 ? 石英砂 ？ 一、叶绿体色素的提取 二、叶绿素的荧光现象 叶绿素分子对光的吸收及能量 的释放示意图 叶绿素的荧光现象 反射光（荧光） 透射光 记录观察到的现象并说明原因 三、叶绿素的皂化作用 C32H30ON4Mg COOCH3 COOC20H39 + 2 KOH C32H30ON4Mg COOK COOK + C20H39OH + CH3OH 四、叶绿素与类胡萝卜素的吸收光谱 1 bChla 2 Chla (430, 670) 3 Chlb (450, 650) 4 Bilin 5 β-Car. 5 类胡萝卜素的吸收光谱 叶绿素的吸收光谱 说明原因 五、氢和铜对叶绿素中镁的取代 盐酸 醋酸铜 叶绿素 去镁叶绿素 HCl Cu2+ 铜代叶绿素 色素提取 荧光 皂化 吸收 代替 方法与步骤 结果 说明现象； 解释原因； 书后思考题。 注意事项： 所用试剂带有强烈的氧化性和腐蚀性！！ 有颜色的试剂！！ 叶绿素的定量测定 原理 根据郎伯-比尔定律, 有色溶液在某一特定波长下的光密度D与其浓度C及液层厚度L成正比. 　 D =kCL k为比例系数。当溶液浓度以重量百分浓度为单位，液层厚度为１cm时，k称为比吸收系数． 叶绿素的定量测定 2 Chla 3 Chlb 5 叶绿素a、b在红光区的最大吸收峰分别位于663nm和645nm。 在叶绿素浓度为g/L时 663nm下： Chla 80%丙酮 k为80.02 Chlb 80%丙酮 k为 9.27 645nm下： Chla 80%丙酮 k为16.75 Chlb 80%丙酮 k为45.6 光密度具有加和性质, 因此可写出以下方程 D663=82.04Ca +9.27Cb D645=16.75Ca +45.6Cb 解方程得： Ca=12.7 D663 - 2.59D645 Cb=22.9D645 - 4.67D663 注意：在此式中叶绿素浓度单位为mg/L。 CT=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663 叶绿素a、b在652nm处有相同的比吸收系数(34.5),也可在此波长下测定一次光密度D652， 求出叶绿素a、b的总量。 CT= D652X 1000 34.5 实验步骤 1. 提取 0.5g菠菜叶片 80% 丙酮 碳酸钙和石英砂 定容至25ml 2. 稀释 根据具体情况调整稀释倍数。 3. 测定：倒入1cm比色杯中, 在分光光度计上测定645nm, 663nm和652nm下的光密度值.重复测定2次,取平均值. 4. 计算：根据上述计算公式计算叶绿素浓度. 根据下式计算叶绿素在叶片中的含量: 叶绿素含量(mg/g鲜重) = CT ×提取液总量×稀释倍数 样品重( g) ×1000 四 思考题: 叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素a、b进行定量分析？为什么？ *