基因工程药物的研究现状——乙肝疫苗.pptVIP

基因工程药物的研究现状——乙肝疫苗 引言： ? 1953年Waston和Crick发现遗传物质DNA的双螺旋结构，给整个生物学乃至整个人 类社会带来了一场革命。此后，一系列有关遗传信息即基因研究的成果很快的向应用和开发拓展。 1972年，美国斯坦福大学P.Berg博士研究小组使用EcorRⅠ,第一次在体外获得了包括SV40?DNA和λ噬菌体DNA的重组DNA分子。 1973年，S.Cohen等将两中分别编码卡那霉素和四环素的抗性基因相连，构建出重组的DNA分子，然后转化大肠杆菌，获得了既抗卡那霉素又抗四环素的转化子菌落，这是第一次成功的基因克隆实验，标志着基因工程的诞生。 1977年Boyer首次获得生长激素抑制因子的克隆， 1982年第一个基因工程重组产品——人胰岛素被批准应用，进入市场。迄今为止，已有50多种基因工程药物上市，近千种处于研发状态。 基因工程药物已经形成一个巨大的高新技术产业，产生了不可估量的社会效益和经济效益，由于基因药物的出现，可以大大改善人类的生命质量， 一 、简介 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus HBV），其表面由HBsAg(乙肝表面抗原)构成。在HBV携带者血液中存在大量的HBsAg。目前，HBV不能再离体组织或细胞内复制，无法用传统方法制造疫苗。但经研究证实HBV携带者血液中HBsAg提纯，去除HBV和其他杂质所制成的亚单位血源乙型肝炎疫苗可有效预防HBV的感染。乙肝疫苗的主要有效成分为HBsAg均吸附于佐剂【多为Al（OH）3】上。 乙 肝 五 项 检 测 表面抗原（HBsAg） 体内是否存在乙肝病毒 表面抗体（抗-HBs） 是否有保护性 e抗原（HBeAg） 病毒是否复制既具有传染性 e抗体（抗-HBe） 病毒复制是否受到抑制 核心抗体（抗-HBc） 是否感染过乙肝病毒 二 、临床上应用的乙肝疫苗的种类 三、什么是重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞） 采用基因工程技术将无传染性的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的S基因片段克隆到载体，用重组载体转染真核生物CHO细胞通过细胞培养、增殖、分泌出HBsAg到培养液中，收集分泌液，经高速离心、纯化、除菌后，加入佐剂吸附（氢氧化铝）而制成。 CHO？ CHO——(Chinese hamster ovary)【中国仓鼠卵母细胞】，该细胞具有不死性，可以传百代以上。全世界应用于人类疾病治疗或预防的基因工程产品大部分是由CHO细胞和大肠杆菌生产的。 另外CHO细胞属于成纤维细胞，是一种非分泌性细胞，本身很少分泌CHO内源蛋白，因此对目标蛋白分离纯化工作十分有利。 四、重组CHO细胞乙型肝炎疫苗的生产工艺 五、重组CHO细胞乙肝疫苗的优缺点 优点：CHO细胞表达的重组HepB是高等真核细胞表达产物，其天然结构较低等的真核细胞酵母表达的HBsAg蛋白更适合人体吸收，生产工程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安全性好。 缺点：产生一些副作用，例如 红肿、疼痛、发痒、手臂酸重等症状，或者是产生低热、乏力、恶心、食欲不振等与一般疫苗相似的轻微反应。 五、疫苗使用方法 一般易感者使用10μg/支，每次注射一支，1个月及6个月时注射第2、3支。 全程注射3次。新生儿使用20μg/支，第一针在出生后24小时内注射，其余两针同上。 高危人群，可用20μg/支。 注射部位为上臂三角肌肌内。 不宜接种乙肝疫苗的人群 有血清病、支气管哮喘、过敏性荨麻疹及对青霉素、磺胺等一些药物过敏者禁用。低体重、早产、剖腹产等非正常出生的新生儿，暂时不宜接种乙肝疫苗。虽然乙肝疫苗对这部分新生儿并无害处，但因其自身的体质状况易发生偶合事件，因此最好推迟接种时间。 六、现有疫苗的发展史及存在的问题 现有疫苗存在的问题 什么是成纤维细胞？ 定义： 普遍存在于结缔组织中的一种中胚层来源的细胞。分泌前胶原、纤连蛋白和胶原酶等细胞外基质成分，伤口愈合过程中可迁移到伤口进行增殖。 成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，细胞呈梭形或扁的星状，具有突起。根据不同的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细胞乃是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动；纤维细胞功能活动不活跃，细胞轮廓不明显，核小着色深，核仁不明显，细胞质少。此二型细胞可互相转化。 作用原理: 成纤维细胞摄取所需的氨基酸，如脯氨酸和赖氨酸等，在粗面内质网的核蛋白体上合成前α多肽链（proalpha polypeptide chain），多肽链输送到高尔基复合体后，组成前胶原分子。前胶原分子由分泌囊泡带到细胞表面，然后通过胞吐作用释放到细胞外