尿中δ-氨基乙酰丙酸（δ-ALA）的测定.pptVIP

尿中δ-氨基乙酰丙酸（δ-ALA）的测定 毒理 ⒈吸收： ⑴主要：呼吸道，以蒸气、烟尘、粉尘形态； ⑵次要：消化道，来自铅作业场所进食和饮水 2.分布：入血的铅大部分与红细胞结合，最后以难溶的磷酸铅的形式在骨中沉积。 ⒊代谢：与钙相似；体内酸碱平衡改变→磷酸铅→磷酸氢铅进入血液→引发铅中毒症状。 ⒋排泄：肾脏、粪便、唾液、汗液、皮屑 中毒机制： ⑴影响二价离子钙、锌、铁的作用； ⑵在细胞内与蛋白质的巯基和细胞器结合，干扰多种细胞酶类活性； ★对造血系统的影响 ⒈卟啉代谢障碍→影响血红蛋白的合成→低色素性贫血；图 ⒉抑制细胞膜ATP酶→膜脆性增加→溶血。 实验室检查指标的意义 1.尿铅：暴露指标。反映近期铅接触水平的敏感指标；波动大，操作麻烦，影响因素多，诊断价值不大；是观察驱铅效果的最好指标； 2.血铅： 反映近期铅接触的敏感指标；浓度与中毒的程度密切相关； 3.ZPP与FEP： 测定快速、稳定、简便、经济；已成为现场筛选铅中毒的首选指标 4.尿ALA测定：效应指标。敏感性较差，早期诊断不够理想；与其他指标联合应用，为一项常用指标 5.血ALAD：最为敏感，可以作为环境检测指标。 6.骨铅、齿铅、发铅：反映长期铅暴露水平。 原理： 尿中δ-ALA与乙酰乙酸乙酯合成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，与对-二甲氨基苯甲醛作用生成红色化合物，在波长554nm处比色定量。 一、实验目的： 掌握尿中δ-氨基乙酰丙酸（δ-ALA）分光光度法测定方法，加深对“铅影响卟啉代谢和血红素合成的机制”的理解。 二、实验材料 仪器： 分光光度计和比色杯；比色管；离心机；水浴锅；尿比重计 采样、运输和保存 用塑料瓶收集铅作业工人尿样50ml，尽快带回实验室（夏季运输时最好冷藏），测比重后，放4℃冰箱可保存二周。 三、测定方法和步骤： 标准曲线的绘制 样品测定 1. 标准曲线的绘制 ① 取6支比色管，按下表配制标准管。 向各管中加入2 ml乙酸盐缓冲液，0.4 ml乙酰乙酸乙酯，混匀。 于沸水浴中加热12 min，取出冷却至室温。 萃取：各加入4 ml乙酸乙酯，加塞振摇l00次，离心5 min，静置分层。 各取2ml乙酸乙酯提取液（上层）于另6支比色管中，各加2ml显色剂，混匀，静置10 min 在554 nm处，用比色杯，以零管为参比测量吸光度。 以吸光度为纵坐标，δ-ALA含量为横坐标，绘制标准曲线。 四、计算 ①按下列公式计算尿样换算成标准比重下的浓度的校正系数（k）。 ②计算尿中δ-ALA的浓度。 X：尿中δ-ALA的浓度，mg/L； M：样品管中δ-ALA含量，μg； V：分析时所取尿样的体积，ml 五、注意事项 本法的检测限为0.30 mg/L（取0.5 mL尿样）。测定范围：0.30～10.00 mg/L。精密度：CV 1.2%～3.6%。准确度：铅接触者的尿样加标回收率平均89.0%～95.7%(加标量：1.0，2.0，3.0， 5.0mg/L，n=6)。 接触者的尿样采集时间不限，采样时不存在污染问题。尿样4C保存14 d相对偏差为+5.6%。 煮沸时间应从比色管放进水浴后，水重新沸腾，开始计算时间，不得少于12 min。 尿中δ-ALA含量高或颜色较深时，可减少取样量。 本法中红色生成物在60 min内稳定。 乙酰乙酸乙酯如变黄色即不能使用。 显色剂（现配）：于30ml冰乙酸中加入1g对-二甲氨基苯甲醛，5ml高氯酸，5ml水，溶解后用冰乙酸稀释至50ml，混匀，存于冰箱中。 1.标准曲线绘制： 取6支比色管，按下表配制标准管。 向各管中加入2 ml乙酸盐缓冲液，0.4 ml乙酰乙酸乙酯，混匀。 加热：于沸水浴中加热12 min，取出冷却至室温。 萃取：各加入4 ml乙酸乙酯，加塞振摇l00次，离心5 min，静置分层。 各取2ml乙酸乙酯提取液于另6支比色管中，各加2ml显色剂，混匀，静置10 min。 在554 nm处，用比色杯，以零管为参比测量吸光度。 以吸光度为纵坐标，δ-ALA含量为横坐标，绘制标准曲线。 2. 样品测定 先测定比重，然后各取1ml尿样于2支10ml比色管中，各加1ml水，2ml乙酸盐缓冲液，混匀，其一为样品管，加0.4 ml乙酰乙酸乙酯；另一为尿样空白管，加0.4ml乙酸盐缓冲液。 取制备的样品溶液，按标准管操作。测得吸光度后，将样品管的吸光度减去尿空白管的吸光度，从标准曲线上查出样品管中δ-ALA的含量。 * 张世鑫 胞液 血 红 蛋 白 血红素 珠 蛋 白 线粒体 血红素合成酶 （亚铁鳌合酶） 原卟啉Ⅸ 原卟啉原Ⅸ 氧化酶 ZPP FEP