甜味受体的研究进展.pptVIP

* * * * * * * * 试验研究了T1R2的N末端胞外域在甜味感受中的作用。试验前提为人能识别甜味剂阿斯巴甜和Neotame的甜味，而鼠不能。当用小鼠的T1R2 N末端胞外域替代人甜味受体相应部位以后，人的味觉细胞对阿斯巴甜和Neotame失去了甜味反应，而用人的的T1R2 N末端胞外域替代小鼠甜味受体相应部位以后，小鼠味觉细胞表现出与人相似的味觉反应。 试验也研究了T1R3在甜味识别中的作用， 同样的，人能识别甜蜜素的甜味，而小鼠不能，当用小鼠T1R3 C末端胞外域和跨膜区替代人甜味受体的相应部位时，人的味觉细胞对甜蜜素没有反应，而用人T1R3 C末端胞外域和跨膜区替代小鼠甜味受体的相应部位时，小鼠味觉细胞表现出与人相似的味觉反应。 * * Jiang等，2005进一步证实了甜蜜素是与T1R3的N末端胞外域结合的。T1R3上1－547位氨基酸编码捕蝇夹区域，547－567位氨基酸编码和半胱氨酸富集区，568－852位氨基酸编码跨膜区域，当用人和小鼠的不同区域组合形成嵌合体并测试其对D－try和甜蜜素的反应活性，我们可以看到hT1R3和各种嵌合体对D-try都有反应活性，而当人T1R3受体的跨膜区被小鼠相应部位替代以后，嵌合体失去了甜蜜素的反应活性。 C图表示hT1R3跨膜区是识别甜蜜素所必需的部位。 * * 随后进一步的试验表明甜味受体与α-味蛋白是在小肠腔内上皮细胞表达的，其作用包括感受、识别食入糖类和调控随后的甜味转导，从而调节肠道对糖类吸收能力的调节 。 * * 采用逆转录PCR技术从克隆CD-1小鼠小肠近端黏膜中分离得到mRNA。序列分析证实了所有的PCR产物与已报道的从舌味蕾克隆的小鼠序列有100％的同源性，提示味觉受体是在近端肠道表达的。 * * 原因：（1）受体在细胞中的表达水平极低，（2）受体只在细胞亚型中表达，而不是表达于隐窝－绒毛轴的所有上皮细胞。 * * radial axes * * 采用了免疫组织化学方法和实时PCR技术，测定肠道黏膜中味觉信号分子。 说明胃中可能没有甜味感受能力。 与Dyer（2005）试验结果不一致：小鼠十二指肠、空肠和回肠中都有T1R2的表达，只是表达水平较低。 原因？？？ * * 4.1 GPCR—Gs－cNMP途径 蔗糖等糖类与甜味受体(异二聚体TIR2／TIR3)结合，使G蛋白α亚单位活化，从而激活胞内的腺苷酸环化酶（AC）产生cAMP，导致胞内的cAMP浓度上升，而cAMP可以激活了蛋白激酶A(PKA)，引起味细胞基部外侧K+通道的磷酸化，导致离子通道关闭，抑制了K+外流，引起味细胞膜去极化，电压依赖性Ca2+流人，神经递质释放。其次cAMP也可以直接通过cNMP－门控通道引起Ca2+内流。 4.2 GPCR—Gα／Gβγ－IP3途径 人工甜味剂结合甜味受体，活化Gα或Gβγ时，使磷脂酶C-β2(PLC-β2)发生异构化，激活磷脂酰肌醇，产生肌醇三磷酸（IP3）和二脂酰甘油（DAG）（Bernhardt等，1996），增多的IP3和DAG导致胞内钙库(如内质网)膜上IP3-门控Ca2+通道开放，使钙库内部储备的Ca2+释放，胞质内游离Ca2+浓度上升，激活蛋白激酶C(PKC)，PKC通过磷酸化修饰K+通道，从而关闭K+通道，引起味细胞膜去极化和神经递质释放。 * * Varkevisser（2000）试验研究表明人工甜味剂信号转导途径中的PKC的活化可能抑制某些味蕾中蔗糖的信号转导，表现为这些味蕾在PKC抑制剂的作用下对蔗糖的反应活性增加，这说明蔗糖的信号转导途径可能与人工合成甜味剂的信号转导途径负偶联。 PDE：磷酸二脂酶 * * 另外，由人工合成甜味剂刺激产生的IP3也可能产生这种抑制作用。IP3可以引起胞内Ca库的释放，使得胞内Ca2＋水平上升，从而激活CaM-PDE，降低胞内cAMP水平，抑制蔗糖的甜味反应。 * * 比较两个信号转导途径的异同之处， 两个甜味信号转导途径都通过阻断细胞静息K＋电流，使味觉细胞去极化，并且二者表现出交叉适应性（Cummings等，1996）。不同的是，天然糖类通过Ca2+内流引发动作电位，人造甜味剂则通过释放胞内贮存的Ca2＋来产生动作电位。 因此cAMP和IP3/DAG第二信使途径可能共同作用于相同的K＋通道。 * * 因此我们可将刚才看到的那张信号转导图总结为这样。 * * 人工合成甜味剂 IP3 Ca2+ store CaM-PDE + cAMP 蔗糖的甜味反应 都通过阻断细胞静息K＋电流，使味觉细