牙齿保健食品功能学评价程序和检验方法.DOCVIP

健康食品之牙齒保健功能評估方法 880802衛署食字公告 壹、前言 牙齒保健食品，其功能係以能降低齲齒之發生率或牙菌斑形成現象；但不應有明顯化學刺激而直接會造成口腔黏膜或牙齒之傷害，或過於堅硬而易造成牙齒磨耗、破折或牙周傷害之情形。 齲齒是屬於多因子所造成的疾病（multifactorial disease），其發生應考慮牙齒組成元素、形態、位置、涎液組成成份、酸鹼值、分泌量、粘度、抗菌因子、飲食中的碳水化合物含量、氟化物、維生素以及其物理性質。齲齒盛行率方面之評佔，在傳統上多以流行病學上之觀察為主，但是牙齒保健功能食品之評佔，如從流行病學上齲齒盛行率方面加以評估，必然會耗費過多的人力、時間及金錢，而且在精確度方面，亦會受到質疑，因此，本評估方法採用動物抗齲齒實驗及人體牙菌斑實驗二項。 關於動物抗齲齒實驗，由於目前引發動物齲齒技術的成熟及一致化，對食品降低齲齒發生率方面之評估，應有相當高的精確度，除此之外，尚可排除流行病學上多重因子所造成的干擾，並且可以減少大量的費用，以及實驗執行及結果判斷上的困難。 降低口腔內細菌的數量，可減少齲齒及細菌造成的牙周病之發生率。而會影響到牙齒保健的細菌，皆是以牙菌斑（plaque）形式存在。牙菌斑是一層附著在口腔內牙齒表面上的一層膜，外表變化可以從透明的外觀到白色堆積物（的外表變化）。牙菌斑內的細菌包括有各種球菌，桿菌及纖毛菌，其中最容易引發齲齒或導致牙周發炎的主要牙菌斑細菌有Streptococcus utans, Streptococcus sanguis, Actinomyces viscosus及Porphyromonas gingivalis. 牙菌斑可由人體直接取樣、觀察、分析，其實驗之方法及結果之判斷已有公認之一致性步驟。 因此，人體實驗部分以檢測人體牙菌斑之三種變化（酸鹼值、堆積量及Streptococcus mutans數量）來評估食品之牙齒保健功能。 貳、實驗方法 一、動物抗齲齒實驗 （一）原理：利用會在動物引發齲齒之細菌和蔗糖來引發齲齒，而用來評估測試食品之抗齲效果。 （二）方法： 1.分設實驗組及對照組，每組各40隻大鼠。 2.二組之飲水中，皆添加5%蔗糖，採用自由餵食。 3.二組之實驗鼠，皆應接種細菌，使用Streptococcus sobrinus 6715（108cell/ml） 之菌株，可於口腔塗拭或或添入於飲用之糖 水中。 4.接種二天後，使用口腔棉花擦拭法（oral swab method ）採得檢 體，並用含200μg/ml streptomycin sulfate 之 Mitis Salivarius Agar 培養，檢視是否接種成功。 5.接種成功後，實驗組投予混合有測試食品之飼料，而對照組仍給與大鼠飼料Lab Chow 500l。. 6.測試食品餵飼20日後，各犧牲第一批五隻，以後每隔20日犧牲一批。 7.大鼠犧牲後，牙齒採用Keyes caries score 方式記錄，並比較二組之差異。 8.Keyes caries score 之記錄，應採用Keyes caries scors card之方式（Animal Models in Dental Research, J.M. Navia, p.289, the University of Alabama School of Dentistry, 1977, Alabama, U.S.A.）。 9.大鼠犧牲後，應將上下顎骨切下，清除周圍軟組織，並將之乾燥，使牙齒部位便於觀察及操作。 10.觀察臼齒之頰側、舌側、咬合面、鄰接面及牙溝之齲齒變化。 11.觀察牙溝時，應用環狀鋸將臼齒近遠心縱切。 12.齲齒之嚴重程度，E為1，DS為2，DM為3，DX 為4。 E為齲齒之部位只限於牙釉質 DS侵犯至牙釉牙本質交界處 DM侵犯至牙本質 DX牙本質嚴重破壞 13.經統計其數值後，再比較實驗組及對照組之差異，如果實驗組之數值較對照組為低，經Students T-test 統計，若P＜0.05 時，該測試食品有抗齲效果。 註：1.為避免遭Streptococcus mutans 污染，應採用specified pathogen- free 之大鼠。 2.飼料及飲水應經消毒。 3.為便於齲齒部位之觀察，可將顎骨浸泡於Kernechtrot B salt飽和溶液中6小時。 4.如果使用接種之菌種為