血细胞分析的溯源.pptVIP

血细胞分析的溯源及质量保证 国际参考方法建立 国际参考方法vs目前方法学的溯源 血液学实验室的质量保证 血细胞分析的基本内容 红细胞计数 白细胞计数 血小板计数 血红蛋白浓度的测定 白细胞分类 血球之父，行业鼻祖 1947年，华莱士.库尔特先生获得库尔特原理的发明专利。迄今，全球有95%的血细胞分析仪采用库尔特计数原理。 1953年，全世界第一台血细胞计数仪由库尔特家族研制诞生。 溯 源 血细胞计数 显微镜计数→库尔特计数→多参数计数（物理、化学、免疫学法） 相关问题：检测结果大相径庭(室间差异)，需标准化 溯 源 欧洲血液学会召开了题为“血细胞分析技术及其标准化”的研讨会——1963年，里斯本 1、成立国际血液学标准化委员会( International Council for Standardization in Haematology) 2、解决室间差异 3、建立血液细胞分析的国际参考方法 4、建立溯源体系：各方法与国际参考方法比较 参考方法（Reference method） 一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供高度准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法，参考方法的准确性必须与决定性方法进行比较。参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。 （ICSH） 红细胞国际参考方法（ ICSH， 1994年） 原理：电阻法（ ZBI 法） 方法：采用Coulter ZBI电子细胞计数仪（单通道、半自动），测定固定容量的颗粒数。用等渗缓冲生理盐水作1/50000倍稀释，测量和纠正重合误差。单通道计数仪，能用于检测通过小孔的红细胞、白细胞，小孔为100μm和70μm，其长度：直径比率为1。用水平压力计控制稀释细胞悬液的流量为1ml，与脉冲分析仪连接，设置阈值下限，微型计算机采集数据纠正重合误差。对于新鲜血和乳胶颗粒重复测定精度可达0.35%。 红细胞国际参考方法（ ICSH， 1994年） ☆技术要求： 1、检测系统所有血液流路部分都采用多年不会变形的石英玻璃部件； 2、定量部使用水银压力计； 3、稀释使用A 级的精密烧瓶和精密吸管； 4、为了最大程度减少流体检测中的误差, 设计尽可能简单。 红细胞国际参考方法（ ICSH， 1994年） 利用不同浓度的标本同时通过检测部位的细胞数的比例不同的原理,以连续稀释的检测结果计算出无限稀释倍率浓度时的检测结果(在该浓度下,可认为没有细胞同时通过检测部) ,并将该结果确定为所测标本的“真值”。 白细胞国际参考方法（ ICSH， 1994年） ZBI 法： 只作一次稀释，加入Zapoglobin后在1-5分钟内计数。其他同红细胞计数要求 血小板的国际参考方法（ ICSH， 2001年） 原理：流式细胞仪间接计数血小板 方法：采用EDTA抗凝全血，加特异性荧光标单抗（CD41和CD61）染色血小板，被染色血小板在流式细胞仪上根据荧光强度和散射光，得出PLT和RBC比率，再根据血小板和红细胞的比率,乘以红细胞参考方法所检测得到的红细胞真值来间接计算出血小板的真值。 计数至少50000个血小板，精度可达2%。用血细胞计数盘直接计数血小板的方法，因为计数盘误差为1%，若计数500个血小板，精度为5%。 血红蛋白国际参考方法（ ICSH，1978年） 测定溶解红细胞中血红蛋白转化成氰化高铁血红蛋白的吸光度 血红蛋白国际参考方法（ ICSH，1978年） 技术要求： 1、分光光度计的质量, 2、石英比色杯的精度, 3、标本的稀释精度, 4、根据参考方法中的规定对试剂进行调整, 5、按照规定使用清洁的过滤网对标本进行 测试前的过滤等。 PCV 国际参考方法（微量离心法） 该法同精密毛细管法相比,从开始操作开始到往精密毛细管内吸入红细胞的步骤是相同的,但是计算时却慎重地避开了精密毛细管的上部和下部仅取中央部分,通过国际参考方法测定该部位的血红蛋白浓度。其结果与国际参考方法测得的全血的血红蛋白浓度的比率为PCV。 血细胞分析结果的溯源性 使用国际参考方法对加入抗凝剂EDTA2K的正常人新鲜血液进行检测,其结果作为该标本各指标的真值（A）。 血细胞分析结果的溯源性 使用要校准的血细胞分析仪(下称检测系统) ,对同一标本进行检测,并对检测结果进行修正使其与国际参考方法的检测结果相同,该检测系统(B) 与国际参考方法具有可溯源性,即A = B。 问题：如果将某一区域内所有相同的检测系统(C) 都使用上述的同一份新鲜健康人血液进行检测,并把检测结果修正到与国际参考方法一致,实际操作中会存在许多困难。