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05.06.08 SAFE: RHD NIPD 标准化 工作流 一个标准化测量方法的确定。 在大量单中心研究中,很多有前景的技术平台的诊断敏感性和特异性被确定。 决定分析敏感性的更高等级的参考物质已在研讨会中通过。 一个质量保障方案已建立,以保障检测水平的可重复性,连贯性以及均一性。 RHD NIPD 筛选中的内对照并非必须要设定的,这一点研讨会已达成一致。 DNA提取方法: 原理 固相 膜 颗粒 与固相结合 阴离子交换 二氧化硅 特异探针 方法 Magna Pure 2 Tecan Genesis 150/4/in-house 1 MDx 1 M48 1 EZ1 1 QIAamp DNA Mini Kit 7 QIAamp DNA Midi Kit 1 QIAamp DSP Virus Kit 1 High Pure Roche 1 CST Genome DNA 1 hybridisation capture in-house 1 MIDI MB CST MINI MINI MINI MINI MINI MINI MINI HP DSP Mean pg/ml 4000 3000 2000 1000 0 Pool 1 2 3 Legler TJ, et al.: Prenat Diagn 2007;27:824-9 标准测量程序 QIAamp DSP Virus Kit (Qiagen, Hilden,Germany), Cat. No. 60704 HP: High Pure PCR Template Preparation Kit, MINI: QIAamp DNA Blood Mini Kit, CST: CST genomic DNA purification Kit, MB: in-house magnetic bead separation method, MIDI: QIAamp DNA Blood Midi Kit /protocols Legler TJ, et al.: Prenat Diagn 2007;27:824-9 LAB EZ1 M48 MDX TECAN MP MP Mean pg/ml 6000 5000 4000 3000 2000 1000 0 Pool 1 2 3 自动化DNA抽提技术 MP: Magnapure Roche, Tecan: Tip-Extraction, MDx, M48, EZ1 instruments from QIAGEN 自动化方法, pool 3: 用于PCR的 DNA 量 pg/well Legler TJ, et. al.: Methods Mol Biol 2008;444:209-18 RHD NIPD 技术平台评估(大规模) QIAamp Blood Kit (Qiagen, Hilden, Germany) n=851 Rouillac-Le Sciellour C et al. Mol Diagn 2004:8:23-31 MagnaPure (Roche Diagnostics, Basel, Switzerland) n=1257 Van der Schoot CE et al. Transfus Clin Biol 2006;13:53-7 Ampliprep (Roche Diagnostics) n=545 Minon JM et al. Transfusion 2008;48:373-381 MDx BioRobot (Qiagen) n=1869 Bristol, UK: Finning K et. al. BMJ 2008;336:816-8 QIAamp DSP Virus Kit (Qiagen) n=1022 Chemagen Separation Module 1 (Chemagen, Baesweiler, Germany) G?ttingen, Germany: Müller SP et al. Transfusion (in press) 自动化 DNA-提取方法 SAFE-NoE 调查 2006 2 Magna Pure Roche 1 Magna Pure Compact Roche 1 ABI 6100 ABI 1 Kingfisher Thermo Electron 1 Separation Module 1 Chemagen 1 Tip Extractor (in-house) Tecan 3 Biorobot MDx QIAGEN 1 Biorobot M48 QIAGEN 1 EZ1 QIAGEN 德国可
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