2-1微生物的实验室培养 课件.pptx

真核细胞无细胞结构病毒:原核生物:原核细胞细菌、蓝藻微生物的类群原生生物：单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等真菌:如酵母菌微生物：是广泛存在于自然界的形体微小、数量繁多、肉眼看不见，需借助于光学显微镜或电子显微镜才能观察到的微小生物。培养基的成分及无菌操作技术 1．培养基 (1)培养基概念 按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质。营养物质生长繁殖2.培养基的分类标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少细菌运动、菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产，降低成本用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离3．碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳营养要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物①构成细胞物质和一些代谢产物；②有机碳既是碳源又是能源有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等将无机氮合成含氨的代谢产物有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基①酶和核酸的组成成分；②参与代谢过程中的酶促反应 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。特别提示　(1)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。(2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳源，又是氮源、能源。(3)大凡对生长因子不能合成或合成能力有限的微生物，其培养基中均需额外添加生长因子，而许多微生物能自行合成生长因子，其培养基中不需再添加。【巩固1】 下列培养基配方中能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是(　)。原料①②③④蛋白胨/糖/g5555蔗糖/g5555KH2PO4/g2222伊红/g0.4美蓝/g0.065琼脂/g1020NaCl/g20蒸馏水/mL1 0001 0001 0001 000A.①③ B．②①C．②④D．③①解析　高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来，有高浓度食盐的培养基为选择培养基。在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌，有伊红和美蓝的培养基为鉴别培养基。答案　D培养基的制备与大肠杆菌的纯化技术 1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤： →称量→ → →倒平板。 (2)倒平板的过程： ①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手 。 ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过 。 ③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，左手立刻 。 ④待平板冷却凝固后，将平板 放置，使皿盖在下、皿底在上。灭菌计算溶化拔出棉塞火焰盖上皿盖倒过来2．纯化大肠杆菌 (1)微生物接种的最常用方法是 和 。 (2)平板划线法：通过 在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种 。 (3)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的 ，然后将不同稀释度的菌液分别 ，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得 。稀释涂布平板法平板划线法接种环连续逐步稀释分散到培养基的表面划线梯度稀释涂布到琼脂固体培养基的表面单个细菌形成的菌落3．菌种的保存 为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用 法；对于需要长期保存的菌种，可以采用 法。临时保藏甘油管藏[思维激活2] 除平板划线法与稀释涂布平板法外，还有哪些接种方法？微生物接种技术中最核心的内容是什么？提示　微生物接种方法还有斜面接种及穿刺接种等方法，所有微生物接种方法中最核心的内容是“防止杂菌污染，保证培养物的纯度”。1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算：依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例，计算配制100 mL的培养基时，各种成分的用量 称量：牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称取，牛肉膏和蛋白胨都 易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖2．微生物分离与纯化技术 (1)原理 微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。(2)方法步骤微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三