降解农药真菌筛选.ppt

降解农药真菌的筛选 -----多菌灵降解真菌菌株的筛选 微生物降解农药的途径 介绍多菌灵 实验原理 从长期被多菌灵污染的土壤中，分离并经筛选得到能够降解多菌灵的真菌菌株，它能够利用多菌灵进行生长。通过富集培养法，从土壤中分离得到一株能够较好降解多菌灵的真菌菌株。 实验步骤 1、在90mL 含多菌灵浓度为200mg/L 的富集培养液中加入10g 土样，30℃摇床培养3d 。 2、吸取5mL 转接至多菌灵浓度为400mg/L 富集培养液中，培养3d 。 3、依次连续富集、转接5 次，使多菌灵浓度依次为200、400、500 、600 .800mg/L。 4、富集完毕后，取培养液均匀涂布于相同浓度的多菌灵分离纯化培养基平板上，28℃培养箱中培养。 5、待平板上出现单菌落后，挑取较大单菌落转接至PB（PDA）培养基上，28℃培养，反复纯化至纯培养后保种备用。 实验后续步骤 * * 功能 除草剂（Herbicide） 杀菌剂（Fungicide） 杀虫剂（Insecticide） 化学结构 有机氯类 有机磷类 拟除虫菊酯类 氨基甲酸酯类 无机农药 甲基对硫磷 8 木霉 Trichoderma 六六六 毒杀芬 DDT 阿特拉津 七氯 7 白腐菌 White- rotFunji 2, 4-D DDT 6 棒状杆菌 Corynebacteriu 2,4-D 对硫磷 甲基对硫磷 杀螟松 水胺硫磷 二嗪农 5 黄杆菌 Flavobacterium 敌敌畏 对硫磷 甲胺磷 4 地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis 2,4-D 甲基对硫磷 杀螟松 对硫磷 3 节杆菌 Arthrobacter 六六六 DDT 阿特拉津 狄氏剂 对硫磷 甲胺磷 乐果 七氯 涕灭威 茅草枯 苯硫磷 灭草降 荞去定 杀螟松 2 芽胞杆菌 Bacillus 乐果 六六六 2,4-D 阿特拉津 单甲咪 狄氏剂 敌敌畏 甲胺磷 甲拌磷 1 假单孢菌Pseudomonas 可降解的农药 降解菌 七氯 15 小单胞菌Micromonospora 2,4-D DDT 七氯 14 诺卡氏菌 Nocardia 阿特拉津 甲胺磷 13 瓶型酵母 Neplanocin 阿特拉津 12 链霉菌属 Streptomyces 艾氏剂 七氯 DDT 敌百虫 11 镰孢霉菌 Neurospora 甲胺磷 乐果 2,4-D 敌百虫 七氯对硫磷 西草净 敌百虫 扑草净 10 曲霉 Aspergillus 阿特拉津 艾氏剂 氯磺隆 幼脲3号 9 青霉 Penicillium 可降解的农药 降解菌 随着对一些污染物降解过程研究的深入，微生物降解农药残留的机理也在不断得到深化和拓展，其中，微生物降解代谢农药的方式主要归纳为两种：①酶促降解方式，是微生物降解农残的主要形式，即化合物通过一定的方式进入微生物体内,然后在各种酶的作用下,经过一系列的生理生化反应,最终将农药完全降解或分解成分子量较小的无毒或毒性较小的化合物的过程，主要有氧化、脱氢、还原、水解、合成等几种反应类型。②非酶促方式，主要是指微生物活动使环境pH 发生变化而引起农药降解,或产生某些辅助因子或化学物质参与农药的转化，常见的作用方式有矿化作用、共代谢作用、生物浓缩或累积作用和微生物对农药的间接作用。 多菌灵又名棉萎灵、苯井咪唑44号，是一种氨基甲酸酯类农药，属于尿素的衍生物。它是一种广谱性杀菌剂，对多种作物由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果。可用于叶面喷雾、种子处理和土壤处理等。本品为无味的粉末，在215－217℃时开始升华，大于290℃时熔融，306℃时分解，不溶于水，微溶于丙酮、氯仿和其他有机溶剂。可溶于无机酸及醋酸，并形成相应 的盐，化学性质稳定。 富集培养，指从微生物混合群开始,对特定种的数量比例不断增高而引向纯培养的一种培养方法。在适于目标微生物而不适于其他微生物生长的条件下继续培养，则目标微生物将成为优势种而得到纯培养。 ------多菌灵降解菌株的分离 富集培养基（/L）：K2HPO4 5.71g， KH2PO4 1.70g，(NH4)2SO4 2.63g MgSO4·7H2O 0.095g，MnSO4， 0.05g，FeSO4 0.05g，CaCl2 0.003g， pH 7.0，多菌灵浓度视需要添加 PB培养基（/L）：牛肉膏5.0g 蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g （固体加2%的琼脂） pH 7.0 仅仅把菌株分离出来是远远不够的！ 你就笨寻思。。 得到的菌株是否能在正常温度和PH值下发挥最大最用 如果