淇河鲫甘露糖受体基因克隆及组织表达研究.DOCVIP

附件 （1）该论文在研究领域中的重要性 甘露糖受体（mannose receptor, MR）是一种模式识别受体，属于C型凝集素受体家族甘露糖受体亚家族，主要表达于巨噬细胞、树突状细胞等抗原呈递细胞，不仅是行使固有免疫反应的重要因子，还能根据所结合的配体调节适应性免疫反应的方向（即Th1型或Th2型），在抗感染免疫反应及维持机体内环境稳定方面起重要作用。目前，对鱼类MR的研究才刚刚开始。本研究通过同源克隆和RACE技术，获得了淇河鲫甘露糖受体（CaMR）全长cDNA，并采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术研究了嗜水气单胞菌感染对CaMR组织表达的影响，为进一步揭示CaMR在免疫反应中的作用机制及在淇河鲫疾病防治中的应用奠定了基础。 （2）除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。 （3）本文全部作者同意该手稿投送贵刊。 （4）本论文未发表过或一稿两投。 淇河鲫甘露糖受体基因克隆 及嗜水气单胞菌感染对其基因表达的影响 王俊丽1, 2, 卢荣华2,3, , 梁丽娜1, 刘燕琴1, 聂国兴2.3* （1.河南师范大学生命科学学院，河南 新乡 453007； 2.河南师范大学水产学院，河南 新乡 453007； 3.河南省水产动物养殖工程技术研究中心，河南 新乡 453007） 第一作者：王俊丽（1971-），女，副教授；研究方向：动物营养与免疫、功能性低聚糖与糖代谢生物学；E-mail：wangjunli1971@126.com 通讯作者：聂国兴，男，教授；E-mail：niegx@ 资助项目：国家自然科学基金；河南省高校科技创新团队支持计划（14IRTSTHN013）；河南省自然科学基金（162300410165）；河南省科技项目（142300410159）；河南省教育厅科学技术重点研究项目（14A180007） 论文字数：（正文部分） 图数量：4 表数量：2 摘要：为了解淇河鲫（Carassius auratus var. Qihe）甘露糖受体（Mannose Receptor, MR）的结构特点及其在抗感染免疫反应中的作用，本研究通过同源克隆和RACE技术，获得了淇河鲫甘露糖受体（CaMR）全长cDNA，并采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术研究了嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）感染对CaMR组织表达的影响。结果表明，CaMR cDNA全长4473 bp，5’非编码区81 bp，3’非编码区90 bp，编码一个由1433 aa组成的前体蛋白，其中前20 aa为信号肽。CaMR的氨基酸序列分子结构与其他物种高度相似：胞外一个富含半胱氨酸的结构域（CRD）、一个纤连蛋白II型结构域（FNIID）及8个串连的C 型凝集素样结构域（CTLDs），一个跨膜区和一个很短的胞内区。氨基酸同源性和进化分析表明，CaMR与草鱼、团头鲂、斑马鱼等鲤科鱼类的进化关系较近，与草鱼MR的同源性最高（82.4％）。通过qPCR检测到头肾、脾、心脏、肌肉等10种组织中均有表达，其中头肾表达量最高；嗜水气单胞菌感染后，头肾、脾心脏的表达量均呈先升后的趋势，而肠道则呈下降趋势。本研究为进一步揭示CaMR在免疫反应中的作用机制及在淇河鲫疾病防治中的应用奠定了基础。 关键词: 淇河鲫；甘露糖受体；基因克隆；基因表达；嗜水气单胞菌 甘露糖受体（mannose receptor, MR），又称CD206，是C型凝集素受体家族甘露糖受体亚家族的一员，20世纪80 年代在兔巨噬细胞中首次发现[1]。目前的研究多集中在人和哺乳动物，广泛分布于哺乳动物的巨噬细胞、树突状细胞和各种内皮细胞，通过介导细胞内吞和噬菌作用在维持机体内环境稳定和病原体识别方面起重要作用[2]。MR属于模式识别受体，可识别包括细菌、真菌、病毒及寄生虫等多种病原体表面的多糖成分，不仅是参与固有免疫的重要因子，还能根据所结合的配体调节适应性免疫反应的方向（即Th1型或Th2型）[3,4]。成熟的MR为一细长的不对称单体分子，分子结构包括一个较长的胞外区、一个跨膜区和一个较短的胞内区[5]。胞外区含有三个结构域：一个N末端富含半胱氨酸的结构域（cysteine-rich domain, CRD），一个纤连蛋白II型结构域（fibronectin ype II domain, FNIID）和8个串连的 C 型凝集素样结构域（C-type lectin domain, CTLD）。 对鱼类MR的研究远远落后于人和哺乳动物。虽然Fritzvold等人在上世纪80年代就已报道虹鳟的肝脏可能表达MR[6]，但真正的深入研究只是最近几年才开始。目前已成功克隆的鱼MR基因主要有以下几种：草鱼（Ctenopharyng