二植物组织培养的一般技术.pptVIP

第二章 植物组织培养的一般技术 植物组织培养的一般技术 操作技术 培养基的成分及作用 培养基的种类与选择 培养基的配制方法 操作技术 洗涤 灭菌 无菌操作 培养容器封口物的种类及制作 灭菌 有菌的范畴：凡是暴露在（未经处理的）空气中的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它的表面，毫无例外都是有菌的。它的内部在未经证实之前，也应该作为有菌物体来看待。 无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，经其他物理或者化学灭菌方法处理过后的物体，是无菌的。高层大气、岩石的内部，健康的动物和植物不与内外部表面接触的组织内部很可能是无菌的。强酸强碱、化学灭菌剂等表面和内部是无菌的。 灭菌 培养基的灭菌 不耐热的物质将采用过滤灭菌 玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌 用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌 布制品采用高压灭菌 其他 植物材料的表面灭菌 培养基的成分及作用 在完善的培养基配方中至少应包括下述几个部分： 大量元素 微量元素 铁盐 有机成分 琼脂 糖 植物激素 PH 其它成分 大量元素 植物所需要的元素，其浓度大于0.5毫摩尔/升应该属于大量元素 大量元素包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等九种元素，他们占植物干重的百分之几十到万分之几 生理作用：1）参与肌体构造；2）构成一些特殊的生理活性物质；3）电化学方面的作用:维持离子浓度平衡，胶体稳定，电荷平衡；4）发育方面起的作用：影响植物组织形态发生、器官形成。 微量元素 植物所需要的元素，其浓度小于0.5毫摩尔/升应该属于微量元素。 微量元素包括Fe、Cu、Mo、Zn、Na、Mn、Co　B和I等，通常培养基中添加10-7—10-5就可满足需要 生理作用：酶的催化、细胞分化和维持细胞完整机能等方面 铁盐 采用硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠结合成螯合铁配置而成 作用：促进细胞的分裂与生长；影响叶绿体的结构组成与叶绿素的形成。 有机成分 维生素类：植物组织培养中经常使用维C、维B1（盐酸硫胺素）、维B6（盐酸吡哆素）、维H（生物素）、叶酸和烟酸等，一般使用的浓度为0.1——10mg/l 肌醇：本身没有促进生长的作用，但有助于活性物质的发挥，并参与糖代谢，能使培养组织快速生长，对胚状体和芽的形成有良好的影响 氨基酸：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白、水解乳蛋白 有机添加物：椰乳、香蕉等 琼脂 一种从海藻中提取出来的凝固剂，一般使用浓度为0.6%—1%。以前使用琼脂条，现在使用琼脂粉，以色白、洁净的为好。 糖 糖的作用：a.作为C源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架；b.为细胞的呼吸代谢提供底物与能源；c.维持一定的渗透势。 使用最广泛的是蔗糖和葡萄糖，一般的使用浓度为2%—4%。 一般来说，以蔗糖做糖原时，离体的双子叶植物的根生长得最好，而以葡萄糖为C源时，单子叶植物的根生长得最好。 为了节省成本，一般选用食用白糖。 植物激素 生长素类 细胞分裂素类 其它植物激素 赤霉素（GA3） 脱落酸（ABA） 多效唑（PP333） 生长素类 主要作用：诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根，更重要的是配合一定比例的细胞分裂素诱导腋芽和不定芽的产生。 常用的生长素类物质：2，4－D（2，4－二氯苯氧乙酸）、NAA（奈乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）。 它们作用强弱顺序：2，4－D NAAIBAIAA 细胞分裂素类 主要作用：促进细胞的分裂和器官的分化、延缓组织的衰老、增强蛋白质的合成、抑制顶端优势、促进侧芽的生长及显著改变其它的激素作用。 常用的细胞分裂素类有：KT(激动素)、6-BA(6-苄基腺嘌呤)、ZT（玉米素）、2－iP（2－异戊烯腺嘌呤）、4PU、CPPU（吡效隆）和TDZ（噻重氮苯基脲）。 作用的强弱顺序：TDZ, 4PU ZT 2－iP 6-BA KT。 PH 培养基的PH值，直接影响离子的吸收，过酸过碱对材料的生长都不利。 对大多数植物来说，灭菌之前培养基的PH调到5.6—6.0能达到要求。主要用KOH和HCl来调节。 一般来说，当PH值高于6时，培养基会变硬，低于5时琼脂不能很好的凝固。 其它成分 活性碳 硝酸银 香蕉泥、椰乳 抗生素类物质 培养基的种类与选择 培养基的种类 培养基的选择 培养基选择 常用的试验方法 培养基的种类 第一类为含盐量高的基本培养基，如MS、LS、BL、ER。 第二类为硝酸钾含量高的基本培养基，如B5、N6、SH。 第三类是无机盐中等含量培养基，如H基本培养基和Nitsch基本培养基。 第四类为低盐含量基本培养基，如White、WS和HE基本培养基。 培养基选择 1、基本培养基的选择 （1）在选择一种新的植物材料进行组织培养时，为了尽快建立起再生体系，最好选择常用的一