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AHM实验大实习
“畜牧微生物学” 实验 2009-2010-1 华中农业大学 动物科技学院-动物医学院 大实习 鲜乳的微生物学检验(1周) 一.目的 1. 对微生物学基本操作技能进行综合性操作训练。 2.了解实验方案的设计思路。 3.掌握鲜乳中含菌量的计数方法。 4.学习鲜乳的大肠菌群最近似数的测定方法。 ? 二.内容 1.鲜乳中含菌数的检验 2.大肠菌群最近似数(MPN)的测定 (一)原理 一个活菌可长成一个菌落,计算菌落数。 一. 鲜乳中含菌数的检验 (二)方法 稀释倾注平板计数法 total bacteria amount Plate counts and serial dilutions : * Pour plate method * Spread plate method (三)步骤 样品稀释 倾注平板 培养 计数 稀释倾注平板计数法示意图 注:因为是检测1ml水样中的细菌总数,故不论哪个稀释度,取到平皿中的样量是1ml。 10-1 10-2 10-3 10-4 1# 2# 1# 1# 2# 2# 2# 1# (四)稀释倾注平板计数法的结果记录及报告 二. 大肠菌群最近似数(MPN)的测定 什么叫大肠菌群? 大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。 其定义为:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 (一)原理 大肠菌群数 100 g 100ml水中所含大肠杆菌群的最近似数(most probable number MPN) (二)方法 乳糖胆盐发酵法 蛋白胨 20g 猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000mL pH7.4 (三)步骤 初发酵试验 分离培养 复发酵试验 1.0ml 1.0ml 10-1 初发酵试验 复发酵试验 分离培养 (四)大肠菌群MPN测定结果记录及报告 大肠菌群MPN测定结果记录表 第一天实验内容: 材料及用具的准备 实验分组安排 实习报告一: 根据实习内容写出实验方案(第二天实验开始前提交)。 第二天实验内容: 1.鲜乳中含菌数的检验:样品稀释――倾注平板――培养 2.MPN的测定:鲜乳接种乳糖胆盐发酵管――培养 第三天实验内容: 鲜乳中含菌数的检验:菌落计数、记录数据、得出结果。 MPN的测定: (1)观察乳糖胆盐发酵管的发酵情况并记录产气结果。 (2)分离培养:将产气的发酵管分别转种到麦康凯琼脂平板上。 第四天实验内容: MPN的测定: 复发酵试验:挑取每个平板上的红色菌落1-2个进行G染色镜检并记录染色镜检结果,同时将同一菌落接种微量乳糖发酵管。 第五天实验内容: 1.MPN的测定: 观察微量乳糖发酵管产气情况,记录结果,得出最后结果。 2.总结:回顾整个实验过程,设计――准备――实施――得出结果――清理 3.清洗实验用具。 4. 完成实习报告。 实习报告二: 1.简述鲜乳中含菌数的检验方法并报告实验结果。 2.简述鲜乳的大肠菌群最近似数(MPN)的测定方法并报告测定结果。
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