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PCR技术在转基因食品中的应用 摘要：转基因食品近年来，已经成为公众争论的焦点。本文概述了转基因食品国内外发展现状及在转基因食品安全性基础上，提出了其检测方法—PCR技术，并重点介绍了PCR技术在转基因食品检测上的应用及发展趋势。 关键词：PCR；转基因食品；食品检测 随着我国食品科学技术的发展及现实的需要，食品检测和分析也在不断进步，特别是面对迅猛发展的转基因食品，安全问题逐渐被人们所重视，转基因食品是否安全，转基因食品标识制度能否被严格执行，关键在于是否有准确，可靠的检测技术作保障。PCR技术是1985年诞生的一项DNA体外扩增技术，该技术自问世以来就备受食品科学领域的青睐，在食品转基因成分检测方面具有很大的潜在价值。 PCR技术又称基因扩增技术，是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的缩写，该技术在转基因食品检测的应用过程中表现出灵敏度高、速度快、特异性强、简便、高效等特点，是转基因食品检测的重要手段之一[1]。 1 PCR技术基本原理 类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成面对越来越多的转基因食品，人们的认识并非一致，以美国为首的主吃派和欧洲为首的反对派在全球范围内形成了两大阵营。不久前调查表明，美国、加拿大两国的消费者大多已接受了转基因食品，仅有27%的消费者认为食用转基因食品可能会对健康造成危害。而在欧洲，大多数人是反对转基因食品的，英国尤为明显。缘由是1998年英国的一位教授的研究表明，幼鼠食用转基因的土豆后，会使内脏和免疫系统受损，这是对转基因食品提出的最早质疑，并在英国及全世界引发了关于转基因食品安全性的大讨论。虽然英国皇家学会于1999年5月发表声明：此项研究“充满漏洞”，得出转基因土豆有害生物健康的结论完全不足为凭。但是，转基因食品的安全性问题已引起了消费者的怀疑。79%的英国人反对试种基因改良作物，抵制转基因食品进入市场。 转基因生物和常规育成的品种是一样的，两者都是在原有的基础上对某些性状进行修饰，或增加新性状，或消除原有不利性状。常规育成的品种仅限于种内或近缘种间，而转基因植物中的外源基因可来自植物、动物、微生物。虽然，目前的科学水平还不能完全精确地预测一个外源基因在新的遗传背景中会产生什么样的相互作用，但从理论上讲，转基因食品是安全的。因此通过检测外源基因中目的基因鉴别转基因食品难度较大即使在含有不同目的基因的转基因食品中往往使用相同或相似启动子、终止子或标基因，这些启动子、终止子和标基因DNA序列具有特异性，且大多来自微生物，非植物本身固有，因此通过检测样品是否含有特定启动子、终止子或标基因序列作为鉴别转基因食品依据是一种可行方法PCR技术在转基因食品检测中应用 刘光明等根据转基因农作物中常用花椰菜叶病毒启动子(CaMV 35s)和根癌农杆菌终止子(NOS)序列，设计并合成两对不同引物和相对应两种荧光双链探针(FDCP)，分别建立常规PCR、应用FDCP新型实时荧光PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子方法。试验结果表明，两种PCR方法均能有效检测出35S和NOS片段，其中常规PCR方法具有灵敏度高、特异性好之特点；应用FDCP新型实时荧光PCR方法则更为简便、快速、准确。曹际娟等，应用PCR技术对转基因(GM)玉米及其粗加工食品如：爆玉米花、热玉米棒、速溶玉米片中通常转入基因构建元件35S启动子、NOS终止子和外源抗虫GrvLA(b)目的基因进行检测，对GM玉米检测低限可达到。 刘垣等在研究转基因大豆DNA检测芯片时，在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化同时，比较芯片检测特异性和重复性，并对检测灵敏度进行测试。结果表明，该方法具有较好特异性和重复性，检测灵敏度可达，由于采用多重PCR技术，一次可同时检测多个基因，提高检测准确性和效率。 栾凤侠等针对该实验材料转入外源基因选择标准中通用外源基因CaMV35S，NOS，bar和植物内源基因tRNALeu作为特异性引物，对影响定性PCR检测(反应体系：氯化镁浓度，引物和模板浓度；反应条件：退火温度和时间，循环数等)主要备件进行实验优化和选择，同时对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明，可检测到CaMV35S，NOS，bar外源基因预期大小的目的条带，表明定性PCR检测所优化条件适合转基因小麦。实验还测定定性PCR最低检测灵敏度为1％(w／w)；同时对转入外源目的基因进行表达蛋白检测，蛋白电泳结果表明，检测出1Dx5亚基和1Dvl0亚基。 国内已有文献报道，在借鉴几种传统定量PCR方法基础上，建立一种新的实时荧光定量PCR法对转基因产品进行检测。所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光