3.2.2百日咳原液的质量控制——无菌检查.doc

药品质量管理课程任务实施方案 工作内容 百日咳原液的质量控制——无菌检查 班级 指导教师 时间 地点 工作准备 一、供试品准备 注射用氯化钠 2瓶 二、器材准备 1. 恒温培养箱 2台 2. 高压蒸汽灭菌锅 1台 3. 试管（粗） 72*3=216支（注：规格尽量一致） 4. 透气硅胶塞 216个 5. 超净工作台 3台 6. 10ml移液管 6支 7. 1ml无菌注射器 18支 三、试剂准备 1.硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养需氧菌、厌氧菌） 胰酪蛋白胨 15.0g 酵母浸出粉 5.0g 葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5g L-胱氨酸(或半胱氨酸盐酸盐) 0.5g 硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸 0.6m1) 0.5g 琼脂 0.65～0.75g 刃天青 0.001g 水 1000ml 除葡萄糖和刃天青外，称取上述成分加入水中，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶解后，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2。 在供试品接种前，氧化层的颜色(粉红色)不得超过培养基深度的1/3，否则，须经水浴煮沸加热至粉红色消失(不超过20分钟)，迅速冷却。培养基只限加热一次，并防止被污染。 2. 改良马丁培养基(用于培养真菌) 蛋白胨 5.0g 酵母浸出粉(或酵母透析液100ml) 2.0g 葡萄糖 20.0g 磷酸氢二钾 1.0g 硫酸镁(MgS04·7H2O) 0.5g 水 1000ml 除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH值约为6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2。 3. 营养琼脂培养基(用于培养需氧菌) 蛋白胨 10.0g 琼脂 14.0g 牛肉浸粉 5.0g 水 1000ml 氯化钠 5.0g 取上述成分加入水中，微温溶解后，调节pH值为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2。 以上培养基一般分别按10ml、40ml、100ml、200ml(或其他适宜体积)分装于试管或其他容器中(装量为试管或容器高度的2/5)，随后采用验证合格的灭菌程序灭菌。灭菌后，培养基需经无菌检查合格。合格的培养基应保存在2～25℃，并防止被污染；使用期限不得超过3周。 ◆制备数量： 硫乙醇培养基 10ml/支×2支 每份样品 改良马丁培养基 10ml/支×2支 营养琼脂培养基 10ml/支×2支 对照品（无菌生理氯化钠） 同上 总计： 硫乙醇培养基 40ml 每小组 改良马丁培养基 40ml 营养琼脂培养基 40ml 共6组/班×3班 操作方法 1.取供试品1ml分别加入2支硫乙醇培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基。 2．接种后取1支硫乙醇酸盐流体培养基及营养琼脂斜面置30～35℃培养；然后将另外1支硫乙醇酸盐流体培养基及营养琼脂斜面和2支改良马丁培养基置20～25℃培养，同时以0.9%无菌氯化钠溶液代替供试品，同法操作做阴性对照。培养时间不得少于14天。 结果判定 如硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基均为澄清，或虽显浑浊但经证明并非有菌生长，营养琼脂斜面培养基未见菌生长，判供试品符合规定；如硫