医学类-肿瘤的基因诊断.ppt

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医学类-肿瘤的基因诊断

肿瘤的基因诊断 温州医学院检验医学院 温州医学院附一医检验科 肿瘤是细胞的异常增生 有结构、功能和代谢的异常 具有超过正常细胞增生能力 在细胞内核酸代谢的异常: 肿瘤细胞和正常细胞的核酸代谢有显著的不同; 不同类型肿瘤细胞的核酸代谢也有较大的差异; 相同恶性程度肿瘤细胞的核酸代谢也有所不同。 癌基因的激活 抑癌基因的失活(或缺失) 原癌基因 癌基因 病毒癌基因 肿瘤抑制基因 肿瘤转移相关基因 肿瘤耐药基因等 细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因 癌基因在正常细胞的基因组中 存在 不表达状态 表达水平不足以引起细胞的恶性转化 能够抑制细胞恶性转化或抑制细胞异常 增殖的基因 目前研究较多的有p53基因、pRB基因、p16蛋白、p15蛋白、p21等。 野生型P53生物学活性 当DNA损伤的时候,P53基因就明显表达使细胞在G1期生长阻滞,促使细胞凋亡。 抑制肿瘤细胞生长 保持DNA完整性 包括肿瘤转移促进基因或肿瘤转移抑制 基因。 其表达使肿瘤细胞对药物产生耐药的基因。 血小板衍生生长因子(PDGF) 表皮生长因子(EGF) VGF基因等 ? 可分为四大类 组织特异性基因标志 肿瘤特异性基因标志 血管生成因子 其它与肿瘤转移相关的分子及基质蛋白酶及其抑制剂 指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有,在淋巴组织和血细胞中不存在的。如角质蛋白家族(CK)mRNA、粘蛋白基因、表皮生长因子受体(EGFR)mRNA等。 . 存在于肿瘤及其起源的正常细胞中,不存在于其他细胞。 如CEA mRNA、AFP mRNA、PSA mRNA等。 如血管内皮细胞生长因子(VEGF)等。 对于肿瘤化疗效果及预后进行推测; 还可以将肿瘤抗药基因导人骨髓细胞,特别是骨髓干细胞中,提高机体对于抗肿瘤化疗药物的耐受程度,如此可以加大抗肿瘤化疗药物的使用剂量,提高抗肿瘤化疗的治疗效果。 多药抗性基因一l(MDR1),其编码的蛋白如P-糖蛋白起排流泵作用。 . 其它一些与细胞内药物代谢有关的基因也可以看作是肿瘤抗药基因,如谷胱苷肽S一转移酶(GST),可使机体解毒功能增强;癌基因 bcl-2的表达可抑制肿瘤化疗药物所诱导的肿瘤细胞程序化死亡等。 . 癌基因的突变是癌基因激活的重要方式和途径。除了见到较大范围片段的缺失或插人以及染色体转位之外,大多数情况下,都是少数核苷酸或单个碱基的突变。 . 癌基因点突变的检测 单链构象多态性(SSCP)检测技术等 . EB病毒(EBV) 人乳头瘤病毒(HPV) 乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染 PCR、RT-PCR Southern blot杂交技术、Northern blot杂交技术 基因芯片 基因测序。 肿瘤基因的分子诊断意义 1.肿瘤的早期诊断和筛选 2.肿瘤疗效监测 3.肿瘤的预后判断 4.肿瘤微转移检测 肿瘤基因检测在肿瘤微转移检测中 应用举例 前列腺癌特异性基因DD3PCA3 DD3PCA3是一种非编码RNA的基因,定位于9q21~22染色体。它为前列腺癌特异性基因之一,DD3PCA3 mRNA仅在前列腺癌细胞中表达,而在其它正常组织和癌组织以及细胞系中均不表达。 谢 谢 ! DD3 mRNA 13外显子扩增结果 M:50bp DNA Ladder;1:LNCaP阳性对照;2 ~ 3:PCa;4:PIN;5 ~ 6:BPH;7:直肠癌;8:直肠癌癌旁;9:结肠癌;10:结肠癌癌旁;11:乳腺癌;12:甲状腺癌;13:胃癌;14:胃癌癌旁;15:膀胱癌;16:软组织纤维肉瘤;17:转移性腺癌;18:淋巴结转移性黑色素瘤;19:卵巢成熟性畸胎瘤;20:正常肝脏;21:胆囊;22:胎盘;23:试剂空白。 DD3 mRNA 34外显子扩增结果 M:50bp DNA Ladder;1:LNCaP阳性对照;2 ~ 3:PCa;4:PIN;5 ~ 6:BPH;7:直肠癌;8:直肠癌癌旁;9:结肠癌;10:结肠癌癌旁;11:乳腺癌;12:甲状腺癌;13:胃癌;14:胃癌癌旁;15:膀胱癌;16:软组织纤维肉瘤;17:转移性腺癌;18:淋巴结转移性黑色素瘤;19:卵巢成熟性畸胎瘤;20:正常肝脏;21:胆囊;22:胎盘;23:试剂空白。 前列腺组织和其他肿瘤组织及癌旁组织DD3 mRNA检测结果 M:50bp DNA标准;1:LNCaP阳性对照;2:BPH;3:健康男性志愿者;4~10为PCa;11为试剂空白。 外周血DD3 mRNA的RT-PCR扩增电泳图 RT-PCR检测结果 44例PCa组中13例可见

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