生物组织中还原性糖脂肪蛋白质的鉴定课件.ppt

* 实验一：组成生物体的还原性糖、蛋白质、脂肪的鉴定 还原性糖鉴定 脂肪鉴定 蛋白质鉴定 一、实验材料 1. ⑴、还原糖的鉴定实验：应该选择含糖量高.颜色为白色或近于白色的  植物组织，以苹果.梨为最好。 ⑵、脂肪鉴定实验：含脂肪丰富的花生种子。 ⑶、蛋白质鉴定实验：含蛋白质丰富的大豆或鸡蛋清溶液。 （避免材料自身的颜色对实验变化颜色的掩盖） 2.斐林试剂：甲液：质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液 乙液：质量浓度为0.05g/ml的CuSO4溶液 4-5滴乙液滴入2ml甲液。配完后立即使用。现配现用，先混合再使用。 3.苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ溶液。 4.双缩脲试剂A：质量浓度为0.1g/ml的 NaOH溶液 双缩脲试剂B：质量浓度为0.01g/ml的CuSO4溶液（分开加） 二、实验原理 1、还原性糖+斐林试剂 砖红色沉淀 2、脂肪+苏丹Ⅲ染液 橘黄色 脂肪+苏丹Ⅳ染液 红色 3、蛋白质+双缩脲试剂 紫色 水浴加热 4、斐林试剂和双缩脲试剂的比较： 现配现用，先混合再使用 先加A液后加B液 需加热煮沸 不需加热 还原性糖中醛基被氢氧化铜氧化，氢氧化铜被还原为氧化铜 具有两个以上肽键的化合物在碱性条件下与CU2+形成络合物 砖红色 紫色 都有NaOH和CUSO4两种成分 颜色 不同点 斐林试剂 双缩脲试剂 使用方法 反应条件 反应原理 相同点 选材：含糖量较高、白色或近于白色的植物组织 制备组织液 （制浆 过滤 取液） 呈色反应（加刚配置的斐林试剂）蓝色 水浴加热 砖红色 结论：植物组织中含有还原糖 1、还原糖的鉴定： 三、实验过程： 注入2ML苹果组织样液 注入2ML刚配制好的斐林试剂 振荡、混合摇匀 溶液蓝色 沸水浴2MIN 试管中砖红色沉淀 2、脂肪的鉴定： 取材：花生种子(浸泡3～4h），将子叶削成薄片 ①取最理想的薄片 制片 ②在薄片上滴苏丹Ⅲ染液（2～3min） ③去浮色（用50﹪酒精） ④ 制成临时装片 观察：低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察，可看到橘黄色圆形小颗粒 双缩脲试剂 B3～4滴 选材：黄豆种子（蛋白液） 制备组织样液：大豆组织研磨液或蛋白质稀释液 呈色反应：组织样液2ml(无色） 结论：组织样液中有蛋白质 选材：黄豆种子（蛋白液） 制备组织样液：大豆组织研磨液或蛋白质稀释液 呈色反应：组织样液2ml(无色） 结论：组织样液中有蛋白质 3、蛋白质的鉴定： 双缩脲试剂A2ml 震荡摇匀 紫色 3、蛋白质的鉴定： 双缩脲试剂A2ml 注意：事先留出大豆组织样液，与化学试剂发生反应后的颜色对比 四、实验注意： 1．只有可溶于水且具备还原性的糖才能与斐林试剂发生特殊的颜色反应（葡萄糖、 果糖、麦芽糖） 2．斐林试剂必须现配现用，否则，斐林试剂很不稳定，时间一长，沉淀在底部无法 发生反应。 3．可溶性糖的选材要选择含糖量较高、颜色白色或接近白色的植物组织，以苹果、 梨最好，这样颜色反应就明显。若选用色素较深的材料，对颜色反应就会起掩盖作用。4．斐林试剂在使用时应先把甲和乙混合，然后再加入。因为我们所要的就是新制的  CuSO4，加入后的颜色是由浅蓝色 棕色 砖红色沉淀。 5．沸水浴加热时切记试管底部不要与烧杯底部相接触，以免试管受热不均而发生爆裂。 6．蛋白质鉴定时所加试剂应先加双缩脲试剂A，再加双缩脲试剂B，因为双缩脲试剂的本 质就是在碱性环境下的Cu2+，而且B液要求量适中，否则多余的B液将会与A液发生反应 生成Cu（OH）2显色而遮盖原有的颜色。 7．用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管壁，不易洗刷。 8．鉴定可溶性还原性糖和蛋白质时要留下部分组织样液为对照，这样更有说服力。 9．脂肪的鉴定中选切片时，要选最薄的切片，否则细胞相互重叠，看不清实验效果。 10．注意区分斐林试剂和双缩脲试剂的不同。 1、还原性糖