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RealtimePC R从原理到实验方法及数据分析
Real-time PCR
Xiao Jin
Applied Specialist
Molecular Cellular Biology
Real-time PCR 原理
数学原理
化学原理
Real-time PCR 应用
绝对定量
相对定量
等位基因分型
阴阳性判定
microRNA
荧光定量PCR数学原理
基线 阈值 Ct值 [DNA]0
由于PCR扩增效率的差异使得相同的样品
扩增结果存在很大的差异
同时扩增96的相同样品的结果
扩增曲线：四个阶段
线
性
平台期
图
谱 线性增长期
指数增长期
基线期
平台期
对 线性增长期
数 指数增长期
图
谱 基线期
基线 阈值 Ct值 [DNA]0
什么是基线？
基线就是扩增曲线中的水平部分。
线性图谱 对数图谱
基线 阈值 Ct值 [DNA]0
什么是阈值？
1. 基线（空白）信号的产生是由于测量的偶然误差引起的。
2. 偶然误差的结果满足对数分布。
3. 阈值= 基线（背景）信号标准偏差x 10 。
4. 由于测量的偶然误差而导致测得的荧光信号大于阈值的概率小于10－5 。
5. 当荧光信号大于阈值时，可以肯定是由于PCR的扩增使得荧光强度得以测量。
基线 阈值 Ct值 [DNA]0
什么是C 值？
T
从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数
线性图谱 对数图谱
C 值 C 值
T T
为什么C 值∝[DNA] ？
T 0
n N：产物分子数；N ：起始分子数
N = N0 x (1+e) 0
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