药学医学药物分析ppt课件-药物分析中的新技术新方法.ppt

手性分离色谱 2. 胶束动电毛细管色谱 用离子胶束溶液代替简单的缓冲溶液，使中性组分可按其疏水性的不同及在两相间的分配系数的不同而分离。采用手性分配相，可用于手性化合物的分离。 3. 毛细管凝胶电泳 凝胶的网络结构对溶质具有分子筛的作用，可分离质荷比相同但分子大小不同的组分。 在分子生物学和蛋白质化学上有着十分广泛的应用。 4. 毛细管等电聚焦 根据蛋白质的等电点不同而进行分离。 A A A A A A B B B B B B C C C C D D D D D E E E E E F F AA AA BB BB CC CC DD DD EE EE FF FF pH梯度 高 低 应用： 1. 监测药物生产过程 如：监测青霉素发酵液中有关物质的量 青霉素发酵液的高效毛细管电泳图 1. 青霉素G钠 ；2. 6-APA ；3. 对羟基苯乙酸 ； 4. 邻羟基苯乙酸 ；5. 苯乙酸 * * 第十六章  药物分析中的新技术、新方法 一、手性药物的现状 手性药物（579） 药物（1992） 天然和半合成药物（556） 合成药物（1436） 非手性药物（857） 单一异构体（73） 外消旋体（506） 手性药物（547） 非手性药物（9） 单一异构体（537） 外消旋体 （10） 二、手性药物对映体的药效学差异 1. 治疗作用完全依赖一种异构体 如：S(-)-α-甲基多巴 2. 药理作用差别不大 如：异丙嗪 3. 药理作用类似，但反应强度有差别 4. 药理与毒理作用存在“质”的区别 二、手性药物对映体的药动学差异 1. 吸收 2. 蛋白结合 3. 代谢 1. 间接法拆分对映异构体即衍生化试剂法（CDR） 2. 直接法拆分对映异构体 手性固定相法（CSP） 手性流动相添加剂法（CMP） 三、手性药物拆分的高效液相色谱法分类 采用非手性固定相 四、拆分原理： 1. CDR (R) –SE + (R) –SA → (R) –SE –(R) –SA (S) –SA→ (R) –SE –(S) –SA 手性衍生化特点： 需要高光学纯度的手性衍生化试剂； 反应繁琐费时； 衍生化反应速率重现性较差 只需使用价格便宜、柱效较高的非手性柱 衍生化过程可同时纯化样品 柱前衍生化-反相高效液相色谱法 拆分酮洛芬对映异构体 S-(?)-酮洛芬 R-(-)-酮洛芬 酮洛芬对映体的柱前衍生化示意图 ＊ ＊ 酮洛芬对映体的柱前衍生化方法 酮洛芬对照品溶液(1 mg/mL)0.1 mL 加入正己烷0.6 mL 二氯亚砜溶液 0.2 mL 75℃ 1 h 冷却至室温 吹干后加入S-NEA溶液0.2 mL 5 min 振摇 加入2.0 mol/L H2SO4 0.5 mL 混匀 吹干后溶解进样 二氯甲烷:乙醚 2:1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18, 5 ? m, 150?5.0mm ID， 流动相：乙腈?水-乙酸-三乙胺(55 : 45 : 0.1 : 0.02，v/v)， 流速： 1 ml/min, 检测波长：254 nm 酮洛芬对映体衍生化物色谱图 R S 酮洛芬对映体衍生化物的保留时间为tR=7.3 min，tR=8.5 min，分离度为1.9 2. CSP 利用手性固定相与对映体消旋物相互作用，其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物，使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同，从而得到分离。 常用的手性固定相： 1. Pirkle型相 2. 合成多聚相 3. 环糊精键合相 特点 适用范围广 制备分离方便 定量分析的可靠性高 价格昂贵 奈基乙脲键合硅胶柱拆分苏氨酸（A）和苯丙氨酸（B）的p-溴代苯甲酰胺衍生物对映体色谱图 3. CMP 将手性试剂添加到流动相中，利用手性试剂与药物消旋物中各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异，实现对映体的分离。 常用的手性添加剂： 1. 配基交换型手性添加剂 2. 手性离子对络合剂 3. 环糊精添加剂 特点 可采用普通的非手性固定相 不需对样品进行衍生化 手性添加物的可变范围较宽 高效毛细管电泳 （HPCE） HPCE是经典电泳技术与现代微柱分离相结合的一种快速、高效的液相分离技术。具有以下特点： 1. 高效 2. 高速