药学毕业论文--HPLC法测定左卡尼汀注射液含量及有关物质.doc

HPLC法测定左卡尼汀注射液含量及有关物质 作者：闵翠娥，陆媛，江少仪，谭胜连 【摘要】 目的 建立测定左卡尼汀注射液含量及有关物质的方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱：MCPack NH2色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相：0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液乙腈(体积比35∶65)，磷酸调节pH至4.3;检测波长：205 nm;流速：1 mL·min-1;柱温：30 ℃。结果 左卡尼汀在1.04～8.30 mg·mL-1质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 9;高、中、低3种浓度的平均回收率为100.7%，RSD为1.4%。左卡尼汀的检测限为3 ng，有关物质(E)4(三甲基氨基)2丁烯酯或(Z)4(三甲基氨基)2丁烯酯的检测限为0.02 ng。结论 该法简便、准确、灵敏度高，重现性好，适用于左卡尼汀注射液的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法;左卡尼汀;注射液;有关物质;质量控制 　Abstract:Objective To establish a HPLC method for the determination of levocarnitine Injection and its related substances.Method The HPLC was carried out on a YMCPack NH2(150 mm×4.6 mm,5μm) column with a flow rate of 1.0 mL·min-1 at column temperature 30 ℃，of which the mobile phase was consisted of 0.05 mol·L-1 solution of phosphate buffer and acetonitrile (35∶65,pH4.3) and the detected UV wavelength was 205 nm. Results The calibration curve was linear (r=0.999 9) in the range of 1.04～8.30 mg·mL-1 for levocarnitine,and the average recovery was 100.7%,with RSD 1.4%. The limit of detection was 3 ng for levocarnitine and 0.02 ng for its impurity A. Conclusion It is an accurate,simple,rapid,qualitative method with good reproducibility for the determination of levocarnitine and its related substances. 　　Key words:HPLC;Levocarnitine; Injection; related substances; quality control 　左卡尼汀是一种能量代谢所需的体内天然物质，其主要功能是促进脂类代谢，在细胞相互作用，抗氧化、改变膜性质及调节免疫应答等方面也具有重要作用，已广泛应用于医疗、保健、食品和饲料添加剂等领域。目前文献报道的左卡尼汀含量测定方法有几种，但均有不足之处。我们采用文献[1]所收载的HPLC法，选用不同的C18柱、pH值或流动相比例均难以分离左卡尼汀主成分和杂质A[(E)4(三甲基氨基)2丁烯酯或(Z)4(三甲基氨基)2丁烯酯];文献[2]采用酶法，操作繁杂，干扰因素多，重复性差;美国药典[3]采用的HPLC法，分析时间长(3 h)，且基线很难平衡。而欧洲药典[4]、英国药典[5]收载的左卡尼汀原料中有关物质检查的HPLC法，所选用的色谱柱为丙胺基甲基硅烷键合硅胶柱(aminopropylmethylsilyl silica gel)，在国内尚未找到相应的色谱柱。本文在欧洲药典[4]、英国药典[5]左卡尼汀原料有关物质测定方法的基础上，结合美国药典[3]左卡尼汀注射液的含量测定方法，建立了左卡尼汀注射液含量及有关物质的测定方法。 　　1 仪器与试药 　　日本岛津LC10A高效液相色谱仪(LC10AT泵、SPD10A紫外可见检测器、CTO10A柱温箱、HW2000工作站),sartorius PB21酸度计,Metler Toledo AG135电子天平。 　　左卡尼汀对照品(USP，批号：1359903，质量分数100%)、杂质A对照品(EP，批号：BP907F67029，质量分数100%)。左卡尼汀注射液分别由本