[农业]HSP9O基因论文：基因 基因克隆 mRNA表达 实时荧光定量PCR 近江牡蛎.doc

HSP9O基因论文：近江牡蛎HSP90基因及其对理化胁迫和病原菌感染的反应 【中文摘要】热休克蛋90(HSP90)是热休克蛋白90家族中的主要成员之一,是重要的抗逆分子,有稳定蛋白质结构,保护细胞修复损伤的作用。研究表明海洋双壳贝类HSP90基因可被多种外界胁迫因素诱导调节,可能在生物体抗病抗逆的生理过程中发挥重要作用。近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)作为我国南方沿海常见养殖贝类,养殖过程中,受环境胁迫死亡时常发生。因此,探讨HSP90分子在近江牡蛎抗病抗逆中的反应,以期为进一步阐明HSP90基因在此过程中的作用机制提供基础资料。本研究采用简并引物PCR、RACE和锚定PCR法,克隆了近江牡蛎HSP90的cDNA和基因序列,包括5’端调控区序列,在此基础上,建立实时荧光定量RT-PCR方法,研究了在热休克、孔雀石绿胁迫以及弧菌感染情况下,近江牡蛎HSP90基因的表达变化规律。主要结果如下：近江牡蛎HSP90 cDNA全长2425bp(已提交GenBank,登陆号：HQ450642),包括一个76bp的5’非编码区序列,198bp的3’非编码区序列,具有典型的poly(A)尾及其上游12bp处的真核细胞加尾信号(AATAAA),开放阅读框(ORF)序列长度为2... 【英文摘要】Various stresses faced by the organisms during their lifespan cause direct damage to vital proteins leading to the impairment of cellular processes. Damage to cells as a result of stress can involve one of the two opposing responses:apoptosis, a form of cell death that removes damaged cells to prevent inflammation or stress response that prevents damage and facilitates recovery to maintain cell survival.Heat shock protein 90 (HSP90) is a highly conserved molecular chaperone that plays key role in the foldin... 【关键词】HSP9O基因 基因克隆 mRNA表达 实时荧光定量PCR 近江牡蛎 【英文关键词】HSP90 gene gene cloning mRNA expression real-time fluorescence quantitative RT-PCR Crassostrea hongkongensis 【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 【目录】近江牡蛎HSP90基因及其对理化胁迫和病原菌感染的反应 中文摘要 4-6 Abstract 6-7 第一章 文献综述 10-24 1. 热休克蛋白概述 10-18 1.1 前言 10 1.2 热休克蛋白家族分类 10-11 1.3 HSP90简介 11-18 2. 贝类HSP90研究进展 18-19 3. 基因表达常规分析方法 19-22 4. 研究目的及意义 22-24 第二章 近江牡蛎HSP90基因克隆 24-50 1 材料 24-25 1.1 实验材料 24 1.2 实验主要试剂 24-25 1.3 实验主要仪器 25 2 实验方法 25-40 2.1 实验动物取样及保存 25 2.2 试验用品的预处理 25 2.3 总RNA的提取 25-26 2.4 RNA的质量分析 26 2.5 近江牡蛎第一链cDNA的合成 26 2.6 近江牡蛎HSP90 cDNA全长序列的克隆 26-36 2.7 近江牡蛎HSP90 cDNA全长序列的获得 36 2.8 近江牡蛎HSP90基因序列克隆 36-40 3 结果 40-48 3.1 近江牡蛎RNA 40-41 3.2 近江牡蛎HSP90基因序列克隆 41-46 3.3 近江牡蛎HSP90同源性分析 46-47 3.4 HSP90系统发育树构建 47 3.5 HSP90基因5’端调控区序列 47-48 4 讨论 48-50 第三章 近江牡蛎HSP90基因对理化胁迫的反应 50-64 第一节 非应激条件下近江牡蛎HSP90基因在不同组织器官的表达 50-55 1.1 材料和方法 50-52 1.2 结果 52-54 1.3 讨论 54-55 第二节 热休克处理后近江牡蛎HSP90基因的表达