[农业]发情周期中奶山羊下丘脑—垂体—卵巢轴催产素的免疫组化定位.pdf

维普资讯 300 中 国兽 医学 报 2003年5月 第23卷 第3期 ChinJVetSciMay2003 Vo1．23 No．3 发情周期 中奶 山羊下丘脑一垂体一卵巢轴催产素的免疫组化定位 卿素珠 ，陈树林 ，沈霞芬 (西北农林科技大学 畜牧兽医学院，陕西 杨凌 712100) 摘要：用免疫组化 ABC法，对发情周期中奶 山羊下丘脑一垂体一卵巢轴催产素 (0T)分布进行 了观察研究 结果表明，下 丘脑 中分泌 OT 的神 经元主要分布在 室旁核和视上核 ，在 穹窿周核 、腹 内侧核 、腹外侧核、交叉上核 、背 内侧核 、乳 头 体 、下丘脑外侧 区、下丘脑前核等核 团也有一定数量 的阳性神 经元 ；阳性神 经纤维仅 见于室旁核、下丘脑前核、视上核 等 少数核 团，在正 中隆起和第 3脑 室室周可见到一定数量的阳性神经纤维。在垂体前叶未见到OT免疫反应阳性产 物 ，自垂体柄和正 中隆起 的一侧 可见到平行排列的OT 阳性神经纤维断续地延伸 至神经部 。卵巢的 卵泡及 间质未见 OT免疫 阳性反应 ，，在黄体组织 中存在数量较 多的免疫反应 阳性细胞 ，阳性 细胞主要呈 圆形、卵圆形 ，小梁两侧及 黄 体 中央近腔 区域 的阳性细胞呈长梭形 ，有相 当数量 的阳性细胞具有突起 连续切 片HE染色对照观察显示 ，黄体 中0T 主要 由大黄体细胞产生 ，但 小黄体细胞也存在 0T免疫 阳性反应 。 关键词 ：催产素 ；免疫组化 ；下丘脑 ；垂体 ；卵巢；发情周期 ；奶 山羊 中图分类号 ：Q189；s814．1；$852．1 文献标识码 ：A 文章编号：1005-4545(2003)03-0300—03 动物生殖过程受机体 内外多种因素综合调控 ，其 中起主 1．4 免疫组化 ABC法染色程序 (1)切片入 0．5 Hz0z中 要调控作用 的是下丘脑一垂体一性腺轴 ，即下丘脑通过分 泌释 作用 30min；(2)0．2 TritonX一10O浸泡 1h(37C)；(3)入一 放激素或抑制因子调节垂体促性腺激素 的分泌 ，促性腺激 素 抗兔抗 OT血清 (1；3000，新西兰 Wapta公司)，4C作用 68 再通过外周血液循环作用于性腺 ，影响性腺 的外分泌和 内分 ～ 72h；(4)1；500生物素结合 的羊抗兔 IgG，室温 2h；(5)加 泌 ，从 而控 制动物 的个体发育和 生殖过程_1]。催 产素 (oxy— ABC复合物 (1：500)(ABCKit，美 国Sigma公司)，室温 2h； tocin，OT)是下丘脑特殊分化 的神经细胞合成 的重要生殖激 (6)葡萄糖氧化酶一DAB一硫酸镍铵法呈色[4；(7)切片脱水透 素之一 。已有证据显示 ，除丘脑下部 的大多数脑 区可合成 OT 明、封片，光镜下观察 。以上每步骤 间均 以0．01mol／LPBS液 以外，在下丘脑冲p经垂体系 以外的中枢神经系统 的广泛 区域 充分洗涤 。对照组用 0．01otol／LPBS液代替一抗 ，其余步骤 内也有 OT 的分布 ，甚至在多种动物的卵巢 、黄体 、睾丸、胸腺 同 上。 等外周器官也存在 OT 的免疫反应，其 中在黄体、睾 丸、胸腺 2 结果 还可局部合成 [2]。OT除了能参与分娩和泌乳的调节 以外，还 具有能调节发情周期 ，促使黄体形成和黄体溶解 ，扩张血管及 经免疫组化 ABC法染色 的切片，背景无色或浅蓝色 ，OT 促使 胃肠道平滑肌收缩等生理作用 [3]。为了进一步从形态学 免疫反应产物为蓝色或蓝黑色 ，阳性细胞的轮廓清楚 ，胞质 内 角度探讨 OT在动物生殖调控 中的作用 ，我们运用免疫组化 含蓝黑色或蓝色的反应颗粒 ，核不着色呈空泡状 对照组切片 ABC法对发情周期 中奶 山羊下丘脑一垂体一卵巢轴上 OT免疫 染色均为阴性 ，说 明免疫组化 ABC法具有 OT免疫反应 的特 反应细胞