南农博士生化真题.doc

2009动物生物化学试题 简单题 以下试剂或技术常见于蛋白质研究，请简要说明其用途。 Trypsin 6mol/HCl MALDI-TOF ?-Mercaptoethanol：?-巯基乙醇，可作为保护剂加入到蛋白质的抽提液中，可防止或延缓巯基氧化作用发生。另外，在SDS电泳中，加入巯基乙醇进行热变性可以使蛋白质分子中的二硫键还原. Coomassie blue：一种染料， 解释以下酶学动力学的概念 Kcat：催化常数，在单底物反应中，且反应过程只产生一个活性中间产物时，单位时间内每个酶分子或每一活性部位催化的反应次数。 Km：米氏常数，物理含义是指ES复合物消失速度与形成速度之比，其数值为酶促反应达到最大反应速度一半时的底物浓度，即当V=1/2Vmax时，【S】=Km Vo：酶促反应初速度，指在反应初始阶段，底物浓度基本维持不变时的反应速度。 Ki： Optimum pH：最适pH 以下试剂或技术常见于核酸和基因分析，请简要说明其用途 DNA chips：DNA芯片 Northern blotting：RNA杂交 Restriction endonuclease：限制性内切酶，一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，限于切割其序列之间的键的核酸内切酶。 EB：溴化乙啶 GMSA 问答题 研究人员观察到，肌肉中70kD的原肌球蛋白（Tropomyosin）的离心沉降速度反而比65kD的血红蛋白（Hemoglobin）慢，它们的沉降系数分别是2.6s和4.31s。请给出你对此现象的解释。 沉降系数:单位离心力的作用下颗粒沉降的速度，以Svedberg表示，简称S，单位为秒（s），1S单位等于1x10-13s。沉降速度基本上由分子大小和形状决定。血红蛋白分子是由四个亚基构成 四聚体， 你不会不知道Meselson和Stahl关于DNA半保留复制的经典实验吧？如果复制时全保留的，那么实验结果会是怎样呢？（图） 实验：大肠杆菌在以15NH4Cl为唯一氮源的培养基中生长，经过连续培养使所有DNA分子上都标记15N。15N-DNA比普通的14N-DNA的密度大，在氯化铯密度梯度离心时，这两种DNA分子将形成位置不同的区带。如果将15N标记的大肠杆菌转移到普通培养基（14N的氮源）培养，经过一代后，所有DNA的密度介于15N-DNA,14N-DNA之间，形成了一半含14N，一半含15N杂合子。两代后，14N和14N-15N杂合分子等量出现。在继续培养可以看到14N-DNA分子增多，证明了DNA分子复制时原来的DNA分子均可被???成两个单位，分别构成子代分子的一半，从而证明了半保留复制。 若是全保留复制的，15N标记的大肠杆菌转移到普通培养基经一代培养后，子代均为14N-DNA。 简述信号肽与信号肽学说 依赖cAMP 的蛋白激酶介导了大多数由 cAMP产生的生理效应，不仅有瞬时的信号传递，如肾上腺素引导肌糖原快速分解（几秒钟），还有较长时间的传递（数小时），如引起促生长素抑制素（somatostatin）基因的表达就是其中之一。请简要描述后一种情况可能的生化机制。（图解） PKA：依赖cAMP蛋白激酶，由两类不同亚基构成的四聚体，R2C2 ，R为调节亚基，C为催化亚基，全酶没有活性，只有cAMP结合至R亚基时，导致R与C解离，才形成有蛋白激酶活性的C亚基。 cAMP由ATP在腺苷酸环化酶（AC）作用下转变生成，并可被磷酸二酯酶（PDE）分解成5-AMP失活。AC由五部分组成，兴奋性激素受体（Rs）、抑制性激素受体（Ri）、催化亚单位（C），Gs（鸟苷酸调节蛋白）蛋白、Gi蛋白。G蛋白起核心作用，活化受体通过G蛋白偶联到AC，由G引起AC的兴奋或抑制，从而决定cAMP的浓度的升降以制约细胞内各种生理效应。G蛋白由ɑ、?、γ三亚基组成的多聚体，ɑ是功能亚基，有GTP或,GDP的结合位点及受体结合位点并有潜在的GTP酶活性。在激活前以三聚体中的ɑ亚基与GDP结合的方式存在，无活性。一旦配体与相应受体结合后GDP就解离，G蛋白构型改变，GTP结合形成ɑ?γ-GTP，然后再镁离子参与下，ɑ亚基被激活，G蛋白阿迷分解成有活性的ɑ-GTP和?γ二聚体，游离的ɑ-GTP和?γ二聚体参与调节相应的效应酶或离子通道。随后ɑ亚基发挥GTP酶作用，是与之偶联的GTP水解成GDP，重新形成与?γ二聚体高亲和力的ɑ-GDP复合物，重聚形成三聚体失活。 兴奋性激素与Rs结合，形成复合物后引起Gs蛋白ɑ亚基构象改变，GTP结合到ɑ亚基引起ɑ亚基与?γ二聚体解离。然后Gsɑ-GTP与无活性的C单位结合，使之活化，催化ATP生成cAMP。同理抑制性激素与Ri结合，形成复合物后引起Gi蛋白ɑ亚基构象改变，GTP结合到ɑ亚基引起ɑ亚基与?γ二聚体解离。