[医药卫生]蛛网膜下腔岀血致多器官功能障碍大鼠延髓内脏带FOS蛋白的表达.ppt

大鼠蛛网膜下腔出血致多器官功能障碍综合征延髓内脏带FOS蛋白的表达及迷走神经的作用研究  前 言 多器官功能障碍综合征（MODS） 是指机体在遭受某种急性严重损伤24小时后，同时或序贯地出现2个或2个以上器官或系统功能不全，并达到各器官功能障碍的诊断标准。 其病程演变可简单表示为：原发损伤→机体应激反应→全身炎症反应综合征 ↗MOF→死亡 （SIRS）→MODS ↓ ↘康复 急性脑血管病（ACVD）并发MODS是脑源性多器官功能障碍（CMODS）中最常见的类型，MODS在ACVD后发生率为11％~21％，死亡率为41％~87.1％ 。虽然郭洪志等于1991年首次在国内提出了ACVD并MODS的观点，并描述了ACVD伴MODS的特点，但确切机理尚未阐明。 在关于MODS发病机制的研究中，下丘脑作为应激反应的调控中枢备受关注,而且下丘脑与作为“生命中枢”的延髓有着密切的联系，其中延髓内脏带（MVZ）是免疫信息到达下丘脑等高位中枢的中继站，机体可通过“下丘脑等高位中枢-MVZ-迷走神经”径路起神经免疫调节作用。但是目前国外关于上述通路的研究证据很少，国内的报道也仅限于神经解剖学领域。 c-fos 是早期即刻原癌基因家族中的一员，c-fos的表达产物包括FOS及其相关蛋白。 当机体受到某种刺激时，在中枢神经系统某些部位的神经元会出现FOS蛋白的阳性表达，并且可通过免疫组织化学方法显示出来，是一种形态学和功能学相结合的指标。 研 究 目 的 建立大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）致MODS的动物模型。 观察模型大鼠外周血WBC、肝、肾功能、心肌酶学改变及肺、小肠、肝、肾组织的病理变化。 研究FOS蛋白在大鼠MVZ中的表达规律。 探讨MVZ和迷走神经在SAH致MODS中的可能调控机制。 材 料 实验动物:成年健康雄性Wistar大鼠(清洁级)90 只,体重250-300g,山东大学实验动物中心提供。 实验药品和试剂:兔抗FOS抗体、生物素标记的羊抗兔IgG、生物素卵蛋白辣根过氧化酶复合物购于福建迈新公司。 实 验 方 法 动物分组:随机将大鼠分为15组：正常对照组、假手术组、迷走神经切断组(SDV组)各6只;蛛网膜下腔出血组(SAH组)、蛛网膜下腔出血+迷走神经切断组(SAH+SDV组)各36只,分为4h、12h、24h、36h、48h、72h时相点的6个亚组,每亚组6只。 动 物 模 型 的 建 立 术前准备:在室温22℃及恒定湿度的条件下,大鼠术前禁食12h,禁水4h。轻柔抓取动物,以1％戊巴比妥溶液40mg/kg的剂量腹腔注射麻醉动物。 膈下迷走神经切断(SDV)术:动物麻醉后行剖腹术,于胃小弯处暴露迷走神经左右两干支,距离迷走神经各分支约5mm,丝线结扎左右两干支并切断。SAH+SDV组动物存活4周后再行SAH术。 动 物 模 型 的 建 立 SAH术:动物俯卧位固定在立体定向仪上,在前囱前5mm、中线旁3mm处颅骨钻孔，手术显微镜下将脑膜挑破，当清亮脑脊液流出时，将PE-10塑料管尖端指向双耳连线中点，紧贴前颅窝底蛛网膜下腔送入，深度约1cm，连接微量注射器回吸证实有清亮脑脊液流出后，自插管内注入非肝素化的股动脉自体血100μl。 假手术操作步骤为SDV术+SAH术，但SDV术仅暴露迷走神经左右两干支，不结扎也不切断，SAH术最后经插管注入100μl 生理盐水。 标 本 的 采 集 采血：术后在各时相点将动物麻醉后，常规消毒皮肤，股静脉抽血5ml，立即送化验室检测血常规、肝功、肾功、心肌酶。 取脏器：迅速开胸暴露心脏，从左心室至升主动脉插管，先以生理盐水再换4%多聚甲醛灌注，至动物四肢变硬，立即取脑置于4％多聚甲醛溶液内固定；同时迅速取肺脏、肝脏、肾脏、小肠，置于10％中性福尔马林溶液固定。 检 查 项 目 与 方 法 观察术后各时相点动物的一般情况，包括意识、 精神状态、进食情况、肢体活动等。 观察术后各时相点动物的体温、呼吸、心率改变（麻醉后）。 实验室检查：外周血白细胞、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、磷酸激酶。 病理学检查：肉眼观察大体标本，光镜下观察各脏器的病理改变，并记录。 MVZ内FOS蛋白表达：采用免疫组织化学ABC法 诊 断 标 准 按照盛志勇院士提出的实验动物SIRS、MODS诊断标准作为诊断依据（见表1、2）。 统 计 学 处 理 实验数据用均数±标准差 (X±S) 表示，应用SPSS10.0统计软件包进行处理。 结 果 实验动物的一般情况 假手术组12h内精神轻度萎靡,呼吸加快,12h后好转,进食及活动无异常,针刺肢体的痛反应灵敏。 SDV组术后12h内精神轻度萎靡,