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实习论文 生命科学学院生物技术1班 徐熙 200674020140 实时荧光PCR法检测乙肝病毒DNA在临床中的应用 摘要：探讨实时荧光PCR法检测乙肝病毒DNA在临床中的应用。对168例I临床乙肝病毒携带者的血清标本用ELISA法进行定性检测，再用实时荧光PCR定量检测，对两种检测结果进行相关性分析。PCR定量测定HBVDNA可以真实地反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况，更有利于临床治疗和疗效的观察。并且实时荧光PCR法检测HBVDNA具有快速、准确等优点，而且对低复制持续感染乙肝病人也能诊断。 关键词荧光PCR；血清标志物；HBVDNA Real-time fluorescence PCR detection of hepatitis B virus DNA in clinical application Barbie College of Life Sciences, Northwest Normal University, 730070 Abstract: To explore the real-time fluorescence PCR Detection of hepatitis B virus DNA in clinical application. I for the 168 cases of clinical hepatitis B virus carriers in serum samples detected by ELISA, qualitative, and then real-time fluorescence quantitative PCR detection of the two kinds of test results were analyzed. Quantitative determination of PCR derived HBV-DNA can be a true reflection of hepatitis B virus infection and replication in vivo, and viral load conditions more conducive to the clinical efficacy of treatment and observation. And real-time fluorescent PCR to detect HBV-DNA has a rapid, and accurate, but also for the low replication of hepatitis B patients with persistent infection can be diagnosed. Key words: fluorescent PCR； serum markers; HBV-DNA 乙肝是目前世界上最常见、最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一，据世界卫生组织估计，此病已造成世界上大约每年总共100万多人死亡 。慢性乙肝携带者占世界总人口的10％ 以上，急性乙肝中有20％会转为慢性，进而发展为肝硬化和肝癌因此，准确、快速诊断对乙肝的治疗和预后极为重要。但目前随着乙肝模式的复杂化，临床上对患者的HBV感染复制情况难以判断，有时甚至出现漏诊。HBVDNA是直接反应乙肝病毒存在、活动性复制及具有传染性的可靠指标，荧光定量PCR法在进行HBVNA检测的同时，可以对其进行相对的量化，这对于乙肝患者体内的HBV复制以及传染性有更直接的了解，同时也更有利于临床诊断HBV感染、选择治疗方案及判断预后。 1 材料与方法 1．1 标本来源168例标本均来自200年病人及本院体检者中发现的乙型肝炎患者，其中男98例，女例，15～79岁，平均为47岁。 1．2 试剂和仪器乙肝血清标志物检测试剂盒来自，批号分别为：表面抗原20006，表面抗体2009002，E抗原2009002，E抗体20002，核心抗体2009002，前s1抗原HBVDNA试剂购于中山大学达安基因股份有限公司；酶标仪为ST-360酶标仪PCR仪为7300型荧光定量PCR1．3 检测方法ELISA法：按检测试剂盒说明书操作，乙肝标志物检测项顺序设定为HbsAg、HBsAb、Ag、HbeAb、HBeAb、PreSAg；PCR定量检测：采用核酸扩增实时荧光检测，完全按试剂盒说明书操作。 1．4 统计学处理采用χ检验进行统计学处理，以P0．05为差异有统计学意义。 2 结果 从检测可见，PreSAg的阳性检出率与HBVDNA的阳性检出率具有很高的一致性。在检测出的14种乙肝模式中，小三阳组和1，5项阳性组HBVDNA的阳性检出率以及拷贝数均低于大三阳组(P0．05)。6例1