分子生物学实验室的微生物菌株保存策略.ppt

分子生物学实验室的微生物 菌株保存策略 菌种是一种重要的生物资源，菌种保 藏是从事生物研究工作的重要基础。 菌种保藏就是利用一切条件使菌种不 死、不衰、不变异，以便于研究与应用。 定义：将有用的微生物以特定培养形态在 特定的环境条件下存放，以保持种的存 活、纯粹和遗传性状的稳定。 菌种的保藏: 一、菌种保藏历史及国内外的菌保中心 二、菌种保藏的目的 三、菌种保藏的原理 四、菌种保藏的方法 五、各种菌种保藏方法的比较 六、菌种的衰退与复壮 一、菌种保藏历史 及国内外的菌保中心 微生物的生长周期短，能应用于工业生产，但是人为的不断传代伴随而来的缺陷很容易引起遗传变异。因此，从30年代开始就有菌种保藏的研究报告，并探索出了很多方法。 许多国家都已建立了专门的菌种保藏机构，目前全世界的菌种保藏机构在300个 以上。 我国的菌种保藏机构:  中国微生物菌种保藏管理委员会CCCMS  ( China Committee for Culture Collection of  Microorganisms)委托中国科学院负责担负全国菌种  保藏管理业务,下设六个菌种保藏管理中心。 国外菌种保藏机构： ATCC American Type Culture Collection. Rockvill. Maryland. U.S.A. 美国标准菌种收藏所，美国，马里兰州，罗克维尔市。 CSH Cold Spring Harbor Laboratory. U.S.A. 冷泉港研究室，美国。 IAM Institute of Applied Microbiology. University of Tokyo, Japan. 日本东京大学应用微生物研究所，日本东京。 IFO Institute for Fermentation. Osaka, Japan. 发酵研究所，日本大阪。 KCC Kaken Chemical Company Ltd. Tokyo, Japan. 科研化学有限公司，日本东京。 NCTC National Collection of Type Culture. London United Kingdom 国立标准菌种收藏所，英国伦敦。 NIH National Institutes of Health. Bethesda, Maryland, U.S.A. 国立卫生研究所，美国，马里兰州，贝塞斯达。 二、菌种保藏的目的 菌种保藏的目的就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。 三、菌种保藏的原理 首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等。 四、菌种保藏方法 各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。一种良好的、有效的保藏方法，首先应该能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。 斜面低温保藏法 穿刺培养法 石蜡油封藏法 砂土管保藏法 麸皮保藏法 甘油悬液保藏法 冷冻真空干燥保藏法 液氮超低温保藏法 宿主保藏法 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 （一）斜面低温保藏法--常用保藏法 此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏。 保藏时间，依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。 （二）石蜡油封藏法(也叫矿油保藏法) 此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。 保藏时间： 霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内， 亦可保藏3个月之久。 优缺点： 优点是：制作简单，不需特殊设备，且不 需经常移种。 缺点是：保存时必须直立放置，所占位置 较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。 （三）沙土管保藏法 此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌和形成芽孢的细菌，在抗生素工业生产中应用最广，效果