DNA重组技术的基本工具18PPT.pptx

DNA重组技术的基本工具贾昕宇罗森的故事罗森家里有一只可爱的小巴哥犬。由于年纪小十分贪玩，并且比较喜欢夜生活。所以每天晚上都会偷偷溜出去，漆黑的夜晚几乎怎么也找不到。罗森的故事在完成了帅气的生物老师布置的作业后，他突发奇想，是否可以将萤火虫的荧光基因注入到狗的体内，使它可在夜晚发光呢？于是经过一系列实验，他成功了。一、基因工程DNA重组技术产物：新的生物类型和生物产品技术：1.体外DNA重组 2.转基因技术等原理：基因重组操作水平：DNA分子水平生物体外（考点预测）操作环境：二、基因工程的基本工具“运输车”“手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶/内切酶）载体“缝合针”DNA连接酶1.手术刀——限制性核酸内切酶A.来源：原核生物（考点）B.切割位点：识别特定的核苷酸序列中每条链上的特定核苷酸之间的磷酸二酯键。（是“酯”不是“脂”）D专一性E————1.手术刀——限制性核酸内切酶DNA分子结构示意图氢键D——磷酸二酯键（切割位点）——————E——————1.手术刀——限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶有很多种，根据所切割的不同特定核苷酸之间而不同，包括 EcoR I、BamH I、Hind等。DG与A之间的磷酸二酯键举例：EcoR I 酶EGCTTAA切割G与A之间GAATTCCTTAAG AATTC G切割G与A之间1.手术刀——限制性核酸内切酶C.结果：1.黏性末端——“一长一短”2.平末端 ——“齐平”DE黏性末端CCCGGG切割G与C之间CCCGGGGGGCCC GGG CCC切割G与C之间1.手术刀——限制性核酸内切酶C.结果：DE平末端1.手术刀——限制性核酸内切酶思考？1.要想获得某个特定性状的目的基因必须要用限制酶切几刀？可产生几个黏性(平)末端？D2.如果把两种来源不同的DNA用同种限制酶来切割，会怎样？E2.缝合针——DNA连接酶连接点：恢复被限制酶切开的磷酸二酯键，恢复成“DNA分子”。种类：1.E.coli DNA连接酶2.T4DNA连接酶（等）2.缝合针——DNA连接酶来源：大肠杆菌E.coli DNA连接酶连接对象：黏性末端T4噬菌体来源：T4 DNA连接酶 黏性末端连接对象： 平末端（效率低）DNA连接酶 和 DNA聚合酶的 比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同 形成磷酸二酯键 不同连接双链DNA片段单个脱氧核苷酸添链DNA连接酶 和 DNA聚合酶的 比较反馈练习：以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析：①GC… ②AATTC… ③ …GC ④ …CTTAA CG… G… …CG…G （1）其中①和 是由一种限制酶切割形成 的 末端，两者要重组成一个DNA 分子，所用DNA连接酶通常是 。 （2） 和 是由另一种限制酶切割形成 的 末端，两者要形成重组DNA片段，所用的连接酶通常是 。 ③平T4 DNA连接酶④②黏性E.coli DNA连接酶3.运输车——载体化学本质：DNA分子常用载体：质粒种类：其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等载体1.将目的基因运送受体之中作用：2.携带目的基因在宿主细胞大量繁殖3.运输车——载体载体必备条件： 1.必须有一个至多个切割位点2.必须具备自我复制能力3.必须含有标记基因4.必须安全5.大小应合适，以便提取和操作。天然的质粒一般不能用。质粒是一种裸露的、结构简单的、具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。知识点不怎么多，认真做作业