头孢替安无菌方法学验证.doc

注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯 无菌检查方法学验证 为了保证本品无菌检查方法的检验质量，确保检验结果的准确性和可靠性，根据《中国药典》（2010年版）要求，我们对注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的无菌检查进行了方法学验证考察。验证结果如下： 1、菌种： 大肠埃希菌[CMCC(B)44 102] 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003] 铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104] 枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501] 生孢梭菌[CMCC（B）64 941] 白色念珠菌[CMCC（F）98 001] 黑曲霉[CMCC（F）98 003] 以上菌种均由中国药品生物制品检定所提供，所用菌株传代次数均未超过5代，符合验证试验要求。 材料和仪器 2.1供试品：注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯（批号 厂家：吉林省辉南长龙生化药业股份有限公司 2.2培养基： 营养琼脂培养基（批号081113 中国药品生物制品检定所） 营养肉汤培养基（批号090225中国药品生物制品检定所） 玫瑰红钠琼脂培养基（批号080616中国药品生物制品检定所） 改良马丁培养基（批号090203中国药品生物制品检定所） 改良马丁琼脂培养基（批号081127中国药品生物制品检定所） 硫乙醇酸盐流体培养基（批号0903112中国药品生物制品检定所） 蛋白胨水培养物（批号070112 中国药品生物制品检定所） 2.3仪器 LRH-250A生化培养箱 YXQ-LS-50SII立式压力蒸汽灭菌器 HH-B11-600电热恒温培养箱 9240MBE数显鼓风不锈钢干燥箱 HZY-III型智能集菌仪 全封闭集菌培养器（杭州高得医疗器械有限公司，批号 2.4稀释剂 0.9%无菌氯化钠溶液； 含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液； pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 菌液制备 （1）将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物分别接种至10ml营养肉汤中，取此培养液1ml加到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-3～10-8，使菌数小于100cfu/ml，见表1。 （2）接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基10ml中，30℃～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-8，使菌数小于100cfu/ml，见表1。 （3）将白色念珠菌的新鲜培养物分别接种至10ml改良马丁培养基中，23℃～28℃培养24～48小时，取此培养液1ml加到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-6，使菌数小于100cfu/ml，见表1。 （4）将黑曲霉的新鲜培养物接种至10ml改良马丁琼脂斜面培养基上，23℃～28℃培养5～7天，加3ml～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出菌液，取1ml菌液加到9ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6，使孢子数小于100cfu/ml，见表1。 表1 活菌预试验——活菌计数 菌 名 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 代 数 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 稀释级 次数 10-7 1ml 10-6 1ml 10-6 1ml 10-7 1ml 10-6 1ml 10-5 1ml 10-5 1ml 1 75 68 79 83 69 66 76 2 70 62 71 88 63 72 73 平均值 72.5 65 75 85.5 66 69 74.5 4培养基灵敏度检查 取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天； 取每管装量为9ml 的改良马丁培养基5支,分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。结果见表2。 表2：培养基灵敏度检查结果 培养基 菌种 管数 观察结果 1d 2d 3d 4d 5d 硫乙醇酸盐流体培养基 金黄色葡萄球菌 1 + + + 2 + + + 铜绿假单胞菌 1 + + + 2 + + + 枯草芽孢杆菌 1 + + + 2 + + +