微生物实验-霉菌观察.doc

实验七、霉菌的培养及形态观察 09生科三班一组 郜思齐 200900140026 2010-11-10 实验目的 学习并掌握霉菌形态观察法。 了解四类霉菌的基本形态。 实验原理 霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后改上载玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。对霉菌可利用乳酸石炭酸棉蓝染液进行染色盖上盖玻片后制成霉菌制片镜检。石炭酸可以杀死菌体及孢子并可防腐，乳酸可保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。同时，这种霉菌制片不易干燥，能防止孢子飞散，用树胶封固后可制成永久标本长期保存。 实验器材 菌种：曲霉，毛霉，青霉，根霉。 仪器：分析天平，玻璃棒，三角瓶，小烧杯，加热器，漏斗，纱布，培养皿，载玻片，盖玻片，U 型玻棒，解剖刀，镊子，接种环，移液管，酒精灯，显微镜等。 试剂：马铃薯20g，蔗糖2g，琼脂2g，水100mL，20%甘油等。 实验内容 （1）配制马铃薯培养基 配制200ml马铃薯培养基（PDA），其成分配比及配制方法见附录一。灭菌后无菌操作取培养基分别倒少量于灭菌培养皿中，使之凝固成薄层。再将这一层培养基用解剖刀切割为若干1cm2左右的琼脂块。 （2）制作小室及接种培养 制作：在平皿底部铺一张略小于皿底的圆滤纸片，在其上放一U型玻棒。在玻棒上放上一块载玻片。取方形琼脂块，将其移至载玻片上，载玻片两端各放置一块。 接种：用接种环挑取很少量的菌落接种于琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。 培养：无菌操作在培养小室中滤纸片上滴加2～3ml灭菌甘油,盖上皿盖,于27℃正置培养。 （3）镜检观察 从培养箱中取出载玻片在低倍镜下观察并记录四种霉菌菌丝体及孢子的形态特征，必要时可换高倍镜观察。 （4）注意事项 ①灭菌时盖玻片最好分开包，载玻片、盖玻片不要和平皿接触，防止粘在一起。 ②倒薄片时培养基倒入占平皿底部?即可，然后摇动平皿即可使培养基铺满底部。 接种时尽可能将菌种接在琼脂块边缘，避免培养后菌丝过于密集影响观察。 接种时确认有菌接上即可，接菌量不宜过多，会导致菌丝过密难以观察。 实验结果 菌种 根霉 毛霉 曲霉 青霉 菌落形态 外圈白色，内部暗灰 白色疏松絮状 黑色疏松 外圈白色，内部绿色 有无假根 有假根、匍匐菌丝 无 无假根，有足细胞 无 菌丝形态 透明无隔 较细无隔 透明有隔 透明有隔 孢子梗形态 直立着生于假根上，顶端膨大为孢子囊 由菌丝生出，顶端为球形孢子囊 由气生菌丝分化，顶端为球状顶囊 分生孢子梗顶端不膨大，无顶囊，多次分生形成小梗，形如扫帚 孢子特征 孢子囊位于囊轴上，孢子位于孢子囊中，孢子囊呈圆形，表面光滑 位于球形黑色孢子囊中 孢子梗是辐射状排列,呈冠状，分生孢子黑色不透明，表面粗糙 小梗顶端有分节椭圆状孢子 图片 附录二图2-1及图2-2 附录二图2-3 附录二图2-4 附录二2-5 思考题 P76 (12)黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别？ ①菌丝：根霉无隔有假根，曲霉无隔有足细胞。②孢子梗：根霉位于假根上，曲霉由气生菌丝分化而来。③孢子囊形态：根霉孢子囊表面平滑，曲霉表面不平滑，呈絮状。 (13)如果要求对某放线菌或霉菌不同发育时期（基内菌丝→气生菌丝→孢子丝或繁殖菌丝）进行连续观察，写出实验方案。 ①选取对数期菌落进行同步培养，分化出处于同一生长阶段的菌。②接种，若放线菌则在平皿上插上至少7个载玻片，霉菌则至少接五个小室。③培养观察：在适宜条件下培养，每隔一天在相同时间内取出一个盖玻片进行观察记录。 附录 附录一：马铃薯培养基配比及制作 马铃薯 蔗糖 琼脂 水 40g 4g 3～4g 200ml 制作：马铃薯去皮,切成块煮沸半小时,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,溶化后补足水至200ml，自然pH，高压蒸汽灭菌30min。 附录二：实验照片 图表 2-1根霉 图表 2-2根霉假根 图表 1-3毛霉 图表 2-4曲霉孢子囊 图表 2-5青霉