微生物学及试验试验指导书.DOC

《微生物学及实验》实验指导书 杨翔华 主编 辽宁石油化工大学环境与生物工程学院 第一部分 实验目的 《微生物学及实验》实验课是我院环境科学专业学生必修的一门重要的基础实验课，是学生进入我院实验室的第一门实验课。 《微生物学及实验》实验的目的是使学生掌握微生物学的基本实验方法和技术，正确的使用实验的仪器设备，在学生头脑中建立无菌概念和掌握无菌操作技能是最重要的内容，是学生进行后续课实验和研究的基础。在目前的实验室条件和有限学时的情况下，得到微生物实验技术的基本操作和技能训练，培养学生动手操作能力和创新能力。通过微生物学实验课教学，加深理解和巩固课堂所学的知识，熟悉微生物学实验的基本操作技术，了解微生物实验的基础知识。通过微生物学实验培养学生观察、思考、分析问题、解决问题的能力，养成实事求是、严肃认真的科学态度、创新精神、创新思维和创新能力。 本实验指导书主要内容包括：微生物个体和菌落形态观察、染色方法、培养基制备和灭菌、无菌操作、微生物检测和分离、生理生化反应、影响微生物生长的因素和污染物微生物降解实验，水中微生物分布调查等内容。同时也注意和环境微生物学的联系与区别。 整个实验课中贯穿了显微镜使用—灭菌方法—无菌操作—微生物菌种分离筛选鉴定、选育—微生物代谢作用这一主线。微生物学需掌握的基本操作在实验中得到训练，同时加深了学生对所学微生物学基本概念的理解。实验设计贴近生活，可以大大提高同学们学习微生物学的兴趣。实验内容与目录如下： 序 号 实验名称 学时 实验类型 实验一 光学显微镜的使用及活性污泥中生物相的观察 3 基础验证性实验 实验二 微生物的染色及观察 3 实验三 培养基的制备和灭菌 3 实验四 纯种微生物的分离、转种和培养 3 实验五 有机污染物质的生物降解实验* 4 综合性 实验 实验六 双歧杆菌口服液的发酵制备* 4 *注：实验五为环境科学专业选做实验。 第二部分 微生物学实验室规则 微生物学实验的对象大多为环境微生物，其中某些微生物对人体具有危害性，因此要求进入实验室后必须严格遵守以下实验室规则： 1.进入实验室应先穿白大衣，离开实验室时要脱下白大衣，反折放回原处，不必要的物品不得带入实验室，必须带入的书籍和文具等应放在指定的非操作区，以免受到污染。无菌操作时必须戴口罩，并不得开电风扇。 2．进入实验室进行实验前应先洗手，避免手上的分秘物，食物油，护肤用品和沾染的微生物等对实验造成污染。 3．实验室内禁止饮食、抽烟，不得高声说笑或乱走乱串。 4．各种实验物品应按指定地点存放，用过的器材必须经消毒处理，禁止随意放于桌上或冲入水槽。 5．须送恒温生化培养箱培养的物品，应做好标记（标明姓名、编号、日期、培养时间）后送到指定地点。 6．实验过程中如发生意外事故时，禁止隐瞒或自作主张不按规定处理，应立即报告老师进行正确的处理。如有传染性、腐蚀性的材料污染桌面、地面等，应立即用0. 2%-0. 5% “84”消毒液浸泡污染部位，作用5～10min后方可抹去。如手被活菌污染也应使用上述消毒液浸泡5～10min或肥皂清洗后，再以自来水反复冲洗干净，必要时去卫生所或医院就医。 7．爱护室内仪器设备，严格按操作规则使用。节约使用实验材料，不慎损坏了器材等，应主动报告老师进行处理。 8．实验完毕，应物归原处、将台面整理清洁，将实验室打扫干净。最后以肥皂洗手后方可离开实验室。 第三部分 实验内容 实验一 光学显微镜的使用及活性污泥中生物相的观察 实验项目性质：基础验证实验 所属课程名称：《微生物学及实验》 实验计划学时：3学时 一、实验目的 ????1. 学习并掌握显微镜的原理和使用方法。 2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。 3. 观察几种真核微生物的个体形态，掌握生物图的绘制方法。 二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜，它们由机械装置和光学系统两大部分组成。在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间滴加镜油，这主要有如下二方面的原因： 1. 增加照明亮度 油镜的放大倍数可达100×，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏