革兰氏染色与荚膜染色幻灯片.pptVIP

革兰氏染色与荚膜染色 一、目的与要求： 1、掌握革兰氏染色法和细菌荚膜染色法。 2、观察菌体的一些简单结构。 二、原理及说明： 染料：用作细菌的染料是一些含有苯环为基本单位，并具有发色基和助色基的化合物，若助色基解离后带上正电荷者，能与酸性物质结合生成盐，系为碱性染料，如番红、结晶紫、孔雀绿等；反之，助色基解离后，带负电核能与碱性物质结合生成盐，称为酸性染料。一些具有两类性质的染料称为复合染料。细菌细胞等电点PH一般在2~5，能与中性，碱性及弱酸性的碱性染料结合，因此，通常采用碱性染料进行染色。 染色可分为简单染色和特殊染色。 区别：前者只采用一种染料，适应于菌体一般形态的观察；后者采用两种以上的染料，用于研究细胞内部的构造。 三、革兰氏染色法 革兰氏染色法是把细菌用两种性质不同的染料进行处理，根据细菌对染色反应的不同，可区分为革兰氏阳性（正反应）和革兰氏阴性（负反应）两大类群，故又称为鉴别染色法，这是细菌学中极重要的一种染色法。在正常情况下，某种细菌经过结晶紫染色。碘液媒染，再以酒精脱色，最后以番红复染；如不被酒精脱色菌体呈紫色，称为革兰氏阳性（常以G+表示）；若为酒精脱色，则被番红色复染，使菌体呈红色，称革兰氏阴性（以G - 表示）。 四：方法步骤 1、菌株：大肠杆菌；金黄色葡萄球菌 2、流程路线： 涂片 干燥 固定 草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥 碘液媒染 1min 水洗干燥 95%乙醇脱色 15~20秒 水洗干燥 番红复染1min 水洗干燥 镜检 (1)涂片 干燥 固定: 2 1 （2）草酸铵结晶紫染色1min 水洗干燥 （3）碘液媒染1min 水洗 干燥 　（4）95%乙醇脱色15~20秒 水洗 干燥 （5）番红复染1min 水洗 干燥 镜检 五、注意事项： （1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 （2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 　荚膜染色法 一、原理及说明： 某些细菌生长到一定阶段，在一定条件下会向细胞壁外分泌一层粘性的多糖类物质——荚膜。荚膜含水份多。疏松且较薄。它受热易失水变形。所以，一般不加热固定。荚膜不易染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而将不着色的透明的荚膜衬托出来。 二、材料：钾细菌 荚膜示意图： 三、方法与步骤： 1、总路线：涂片 用1%结晶紫染色3分钟 用20%CuSO4冲洗 镜检 2、涂片： 3、结晶紫染色： 4、CuSO4冲洗： 四、注意事项： （1）不能加热固定，否则荚膜受热失水收缩，失去原形。 （2）涂片不要用力过猛，不要滴加水，以防破坏其荚膜原形. (3)要用CuSO4冲洗，不要用水。 值日：5~8号 五、作业： （1）大肠杆菌呈 色，是革兰氏 性菌；金黄色葡萄球菌呈 色，是革兰氏 性菌。 （2）绘出荚膜形态图。 荚膜示意图： 革兰氏染色步骤涂片 干燥 固定 草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥 碘液媒染 1min 水洗干燥 95%乙醇脱色 15~20秒 水洗干燥 番红复染1min 水洗干燥 镜检 荚膜染色步骤：涂片 用1%结晶紫染色3分钟 用20%CuSO4冲洗 镜检