生化基础知识-比色法精选.ppt

自然光-赤橙黄绿青蓝紫 波长决定颜色 光谱-连续不同波长光的集合 物质对不同波长光的选择性吸收 T、A与颜色的关系 －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 透光率（T） 吸光度（A） －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 1 0.000 0.75 0.125 0.5 0.301 0.25 0.602 0.17 0.770 0.1 1.000 0.05 1.301 0.01 2.000 0.001 3.000 －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 测量物质光吸收的装置-比色计 物质的光吸收曲线-定性分析 朗伯-比尔定律： A=-lgT=KCL 透光度（transmittance，T，透射率） T＝It / I0 吸光度（absorbance，A） 光密度（optical density，D或OD） A ＝-lgT ＝ lg I0/It Lamb-beer定律：A＝KCL K为吸光系数，C为浓度，L为光径cm 摩尔吸光系数ε:当C＝1mol/L，L＝1cm，A= ε 比色法成立的基础 有色或有吸收 单色光 秘密在于选择性吸收了自然光中某一波长的光，而呈现出其互补色，这这两杯溶液呈现不同颜色的原因，就是这个美丽的大自然五光十色的原因。 好了，请回答下面的问题。 1、随着这方面知识的积累，人们希望能用数学模型来解释“物质选择性光吸收”的自然现象。这样可以知道物质到底吸收了多少光？ 2、解释透光度； 3、那么我问一下，剩下的光哪去了？……这部分光就是被物质吸收掉了，那么这个值就是吸光度。它等于透光度的负对数。也就是透光度大，吸光度小；反之，……。 吸光度的概念用来量化物质选择性吸收光的能力。 随后就有人发明了测量物质吸光度的仪器…… 主要由光源，单色器（因为“物质是选择性吸收光”必须把光分离开来），比色杯，检测器等构成，可以测量出物质溶液的吸光度大小，由于物质溶液吸光度大小也就表示其颜色深浅，故把这种仪器称为比色计。 由于单色器可以分离出不同波长的光，又称为分光光度计。 把不同浓度物质溶液放在连续波长的比色计测量A，以A为纵坐标，以波长为横坐标，得到吸收曲线。 我们发现： (1)不同浓度的吸收曲线的形状，吸收峰、谷对应的波长一样，这是由物质本身分子的结构决定，是物质的特性，与浓度无关； (2)吸收峰高度随浓度增大而增大。 根据物质溶液的吸收曲线，我们知道其作用 (1)定性的依据，λmax； (2)反映溶液对光的选择性吸收，和物质溶液呈色的原因； (3)帮助选择入射光的波长。选择吸收最大，干扰最小的波长为定量分析的入射光。 在研究物质光吸收现象的过程中，我们要知道Lambert和Beer这两个人。1760年由Lambert(兰贝特)提出。此人是个调酒师，在工作中发现，同一种红酒倒在大小不等的酒杯中，其颜色深浅不一。他进一步试验，……，提出物质溶液A与其光径成正比。这种善于把握机会的发现，使Lambert名垂千古。 过了快一百年， Beer在 1852年又证实了物质溶液A与C的关系，他做了这个试验……。 随后人们根据Lambert和Beer的研究成果，归纳总结出一个定律……（K是物质本身特性，大小表示物质选择性吸收光的能力）……。为了纪念二者的功劳，称为Lambert-Beer定律。 这个看似简单的定律和公式，开创了根据物质颜色进行定性和定量分析的先河。此定律不仅适用于液态物质，也适合于气态和固态物质。用于物质分析时，其灵敏度很高，达到mg/ml。 回顾一下这几个概念。 * 比色法原理 (分光光度法) 多么美丽五彩斑斓的春天啊 为什么上述溶液呈现不同的颜色？ 　由于物质对不同波长光的选择性吸收而引起，物质呈现的是被吸收颜色的互