手足口病的病原学及试验室检测.PPT

* * * * * * rRT-PCR结果判读 阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准，或可根据仪器噪音情况进行调整。 Ct值≤35.0的样本为阳性。 Ct值无数值的标本和Ct值≥38.0的样本为阴性样本。 38.0 Ct值35.0的样本为临界值。 注：荧光PCR同时读取FAM和HEX，进行双通道检测，FAM荧光Ct值为CVA16的结果，HEX荧光 Ct值为EV71的结果。 生物安全 柯萨奇病毒、埃可病毒、EV71型和目前分类未定的其他肠道病毒均属于危害程度第三类的病原微生物。 在保证安全的前提下，对临床和现场的未知样本检测操作可在生物安全II级或以上防护级别的实验室进行，涉及病毒分离培养的操作，应加强个体防护和环境保护。 生物安全 操作粪便、脑脊液和血液等临床标本时要特别注意生物安全，要在II级生物安全柜中进行标本处理、病毒分离和病毒鉴定，无脊灰疫苗免疫史的人员要进行脊灰疫苗免疫。 灭活后的血清抗体检测与PCR检测可在生物安全I级实验室进行。 所有操作应遵守国家相关法律法规。 * * * * * * * * China measles labnet has 3 dif levels. Each level has their own responsibility and play dif roles. Most of the serology diagnosis for suspected measles cases were done by prefecture labs. Of course they have the responsibility for the specimens collection. National lab and provincial labs also have the responsibility to do the quality control and technical support for their own lower level labs. * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 手足口病的病原学及实验室检测 陈立 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 国家脊灰实验室 2010-04-21 手足口病的病原 引起手足口病的病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属，包括： *柯萨奇病毒A组（Coxasckievirus A, CVA）的 2、4、5、7、9、10、16 型等 *B组（Coxasckievirus B, CVB)的1、2、3、4、5 型等； *肠道病毒71型（Human Enterovirus 71, EV71）； *埃可病毒（Echovirus, ECHO）等。 其中以EV71及CVA16型较为常见。 肠道病毒适合在湿、热的环境下生存与传播，75%酒精和5%来苏不能将其灭活，对乙醚、去氯胆酸盐等不敏感；对紫外线和干燥敏感，各种氧化剂(高锰酸钾、漂白粉等)、甲醛、碘酒以及56℃30分钟可以灭活病毒。病毒在4℃可存活1年，-20℃可长期保存，在外环境中可长期存活。 人肠道病毒感染的一般致病机制 进入途径 口腔/呼吸道 咽喉及下肠胃道 传播 扁桃体、深层淋巴结、肠道淋巴结 微病毒血症 先天性感染 神经系统 心脏 肝脏、 胰脏、 肾上腺 呼吸系统 皮肤及黏膜 病毒血症 神经系统 抗体产生、病毒血症消失，病毒感染症状改善 飞沫、接触、饮食 肌肉 流行病学 传染源 患者和隐性感染者。发病前数天，感染者咽部与粪便就可检出病毒，通常以发病后一周内传染性最强。 传播途径：可经胃肠道（粪-口途径）传播，也可经呼吸道（飞沫、咳嗽、打喷嚏等）传播，亦可因接触患者口鼻分泌物、皮肤或粘膜疱疹液及被污染的手及物品等造成传播 流行：以5岁及以下儿童为主，尤以3岁及以下儿童发病率最高。一般5-7月为发病高峰 实验室诊断——临床诊断病例符合下列条件之一者，即可诊断为实验室确诊病例 自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、脑脊液、疱疹液、血清以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本中分离到人肠道病毒（指包括CVA16和EV71等有明确证据表明可以导致手足口病的人肠道病毒）。 自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子等标本中检测到CVA16 或EV71特异性核酸，或从脑脊液、疱疹液、血清以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本等标本中检测到人肠道病毒（指包括CVA16和EV71等有明确证据表明可以导致手足口病的人肠道病毒）的特异性核酸。 实验室诊断 血清标本人肠道病毒型特异性中和抗体滴度≥1∶256，或急性期与恢复期血清肠道病毒特异性中和抗体