平面色谱法　.ppt

平面色谱法（TLC） 3-1 概述 3-2 薄层色谱系统 3-3 薄层色谱参数 3-4 薄层色谱条件选择 3-5 薄层色谱的应用 3-1 概述（1） 薄层色谱法 指固定相涂布于平面载体上，流动相通常是借助毛细管作用流经固定相，使被分离的物质保留在固定相上的色谱方法 分类 纸色谱 薄层色谱 薄层电泳 纸色谱法 纸色谱是以滤纸为载体的液-液分配色谱。滤纸由纤维素制成，其分子中具有很多羟基，有较强的亲水性，能吸收20~25%的水分，其中6%左右的水分通过氢键与纤维素上的羟基相结合形成的固定相。 若要分离非极性物质可用适当的低级性液体如石蜡油、硅油等处理滤纸。 流动相（展开剂）：与水不相溶（或部分相溶）的溶剂 分离原理： 薄层色谱 将固定相于玻璃或铝箔等载板上涂布成均匀的薄层。展开剂（流动相）借助毛细作用从薄层板点样的一端展开到另一端时使不同物质得到分离。 分离原理随固定相不同而异，基本与柱色谱相同，可分为吸附薄层、分配薄层、离子交换薄层以及凝胶薄层等。 固定相种类多样、显色剂选择及载样量均较纸色谱大，而切割色谱带较柱色谱方便，因此在分离分析及小量制备工作中最为常用。 薄层电泳 电泳法指在一定电场作用下，荷电粒子（如蛋白质、核苷酸、多肽、糖类等）在纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等惰性支持介质上，因粒子大小及荷电种类、数量不同，向两极以不同速度迁移而得到分离的方法。对分离后的组分洗脱后测定或直接扫描可进行定性或定量分析。 驱动力来源、仪器设备及测定对象与纸色谱、薄层色谱差别较大，暂不一起介绍。 3-1 概述（2） 平面色谱法的特点： 仪器自动化程度、分辨率及重现性不及GC、HPLC 一次性的固定相，对样品预处理要求不高；展开剂用量少，经济环保 固定相，特别是流动相选择范围宽，有利用不同性质化合物的分离，因此对待分离组分没有太多限制 具有多路柱效应，可同时平行分离多个样品 3-1 概述（3） 对成份复杂的试样可采用不同类型的流动相双向展开，提高分离效能 可根据各组分的性质选择适当的显色或检测方法进行定性定量分析 试样全部组分均停留在平面上，不会造成检测失落，对未知试样的分析很有利，可随时对谱图测定以获得最佳结果，直观性、可比性极强 现代化薄层色谱采用高效薄层板，且在每步操作均有相应的仪器代替手工，使得定量分析的准确度和重现性大大提高 设备简单、操作方便，是一般实验室必不可少的分离分析手段！ 双向纸色谱法 3-1 概述（4） TLC与HPLC的比较 固定相与流动相 样品的预处理 进样 色谱分离 定量 固定相与流动相 HPLC 流动相线速恒定 流动相选择受限 固定相与流动相性质影响峰形和分离度 定距洗脱色谱，并非所有组分都能被检测，分析时间不可控 柱子反复使用 TLC 薄层板各处流量不同 流动相选择限制小 吸附剂性质和流动相毛细管运动情况影响分离度 定时展开色谱，色谱图上各组分均能被检测，分析时间可控 薄层板一次使用，分离过程无交叉污染，多样品同时分离 样品预处理 HPLC 防止色谱柱被污染，预处理过程复杂而严格 TLC 固定相是一次性的，因此可不需预处理，但如待测组分含量太低、杂质太多影响待测组分的分离或干扰薄层板背景时可采用萃取、吸附及衍生等方式进行处理 可用作HPLC前的预分离富集 进样 HPLC 对溶样溶剂及样品浓度有严格要求 可自动进样，每次一个样品 TLC 溶样溶剂可任意选择，点样体积是唯一需要严格控制的参数 可自动进样，每次可多个样品 色谱分离 HPLC 每次进一个样，分析和平衡时间长 恒组分洗脱适用极性范围窄的样品；梯度洗脱适于极性范围宽的样品并需要更多的时间 反相色谱法最常用 使用相同固定相和流动相时重现性较高 TLC 同时分析多个样品、方便灵活 1 适于各类物质的分离 1 1 正相（吸附）色谱占主导 对复杂样品分离能力好 定 量 HPLC 均相液体，符合比尔定律 1 在线检测，线性范围宽 TLC 不透明液体，不符合比尔定律，需溶解后定量 离线检测，大量样品分析时方便快捷 原位测定（薄层扫描仪） 薄层扫描仪的应用（1） 黄连中小檗碱含量的荧光扫描测定（定量） 薄层扫描仪的应用（2） 巴比妥盐的三维紫外光谱-薄层色谱图（定性） 3-1 概述（5） 平面色谱法操作流程 3-1 概述（6） 薄层色谱法的基本材料及设备 滤纸及薄层板（自制或市售） 涂布器 点样器（定性：普通毛细管；定量：微量注射器或微量定量毛细管） 展开室 显色器 薄层扫描仪 3-2 薄层色谱系统 薄层材料 未改性固定相 改性固定相 载板 粘结剂 荧光指示剂 薄层色谱操作过程 薄层板的制备（