用高浓度缓冲液和25μm鼓泡池毛细管对肝素及相关杂质进行-Agilent.PDF

用高浓度缓冲液和 25 µm 鼓泡池毛细管 对肝素及相关杂质进行毛细管电泳分析 应用报告 药物分析 作者 摘要 Robert Weinberger 肝素污染危机迫切需要开发一种紧急分析方法，以确保被污染的原料不会进入国际市场。 CE Technologies, Inc. 这种方法之一是使用毛细管电泳。正式的 USP 方法于 2008 年 6 月正式颁布。现在的当 Chappaqua, NY 10514 务之急是提高原方法的分离度和灵敏度。该正式方法使用的是 36 mM 磷酸盐缓冲液，pH USA 3.5。能部分分离过硫酸化硫酸软骨素（OSCS），其检出限约为肝素重量的 1.5%。 经过对 Todd Wielgos 各种参数如 pH、缓冲液浓度和对离子进行优化， OSCS 和其它糖胺聚糖（GAGS）（如硫 Baxter Healthcare 酸皮肤素）可以在 10 分钟内完全分离。最佳缓冲液为 600 mM 磷酸锂，pH 2.5。由于分 Round Lake, IL 60073 离需要如此高的缓冲液浓度，所以，需要用 25 µm 毛细管来控制电流。因为毛细管直径决 USA 定了方法灵敏度通常容许的光程长度。安捷伦“鼓泡”池毛细管可以提供比 50 µm 毛细管 更长的光程。再结合高浓度缓冲液制造的样品堆积，使 OSCS 的检出限远远低于 0.1%。 本应用报告报导了一种测定肝素样品中杂质的高速、高分离度、高精密度和高灵敏度方 法。方法耐用，无需特殊的毛细管制备。样品制备只是简单的稀释和过滤过程。 背景 Baxter 一开始就努力鉴定肝素中的未知污 方法的改进 染物。用色谱法不能区分有不良反应和无 虽然正式 CE 方法对鉴定全球市场上高度 肝素是目前仍在使用的最古老药剂之一。 不良反应批次之间的区别。他们尝试了另 污染的肝素非常有用。但该方法的分离度 该药是一种重要的抗凝血剂 ，用于预防透 一种分析方法——毛细管电泳（ CE）。 较差 ，OSCS 的检出限（LOD）只有 1.5% 析病人 、心脏病诊断和血管成形外科手术 2008 年 2 月初，从与不良反应相关的肝 左 右 。而毒 性 杂 质 的 理 想 LOD 应 该 在 病人形成血栓 。肝素锂、肝素钠 、肝素铵 素样品中发现了一个反常电泳峰（图 1）。 0.1% 或更低。 都是绿盖采血管中使用的抗凝血剂 。 而没有不良反应的样品则不出现这个峰。 由训练有素的开发人员进行 CE 方法的开 在 Connaught Laboratories 的一篇通 讯 他们又用唯一能检测未知污染物的其它技 发，实际上很简单，因为肝素及其相关物 中可以查到肝素的发展历 1。肝素是 术——高场核磁共振，对此进行了确证。 质都带负 电荷 ，所以选择 了未涂层毛细管。 1916 年由 Johns Hopkins 分离的，但直到 随即，这种