限制性核酸内切酶pd.PDF

《分子医学基础》数字课程 （微视频） 《分子医学基础》数字课程 （微视频） 限制性核酸内切酶 王昕 《分子医学》课程组 目录 1. 限制性核酸内切酶 - ⑴.概念 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)是一类核酸内切酶，能识别双链DNA分子内部 的特异序列, 并裂解磷酸二酯键。 例如：Bam H Ⅰ G CCTAG GGATCC CCTAGG + + GATCC G 作用 - 与甲基化酶共同构成细菌的限制-修 饰系统。 限制外源DNA 保护自身DNA 细菌能将外来的DNA片段在某些 专一位点上切断，保证其不为外来 噬菌体所感染，而自身的染色体DNA 由于被一种特殊的酶所修饰而得以 保护。 ⑵.命名 Hin d Ⅲ Haemophilus influenzae d株 流感嗜血杆菌d株的第三种酶 属 种 株 序 - 第一个字母为该酶的微生物属名，大写 - 第二、三个字母为该微生物的种名 - 第四个字母为株 - 株中发现了多种，根据发现的顺序，用罗马 字母表示 ⑶.分类 - 根据酶的组成，所需要的辅助因子 及裂解DNA方式的不同，限制型核酸 内切酶可以分成 Ⅰ型 Ⅱ型 Ⅲ型 - ① Ⅰ型和Ⅲ型： 具有限制和修饰作用，但无特异的酶切位 点，切割随意。具有甲基化酶的活性。 - ②Ⅱ型： 对DNA的水解有特异性，要求严格的顺序 作为酶切位点 - 为常用的工具酶 ⑷. Ⅱ型限制性内切酶作用特点 ①.有严格的识别、切割顺序。内切的方式 水解双链DNA的磷酸二脂键，产生DNA的 5 ‵端P和3 ‵端羟基 ②.识别顺序为4— 6碱基，通常为回文顺序 ③.酶切割的顺序大小决定切割后的DNA片 段的长短，按照切割顺序的长度可估计 限制酶的切割机率 ④切口为粘性末端和平口末端。 回文结构(palindrome) GGATCC GGATCC CCTAGG CCTAGG - 末端 平端\钝性末端 5’末端突出的粘性末端 3’末端突出的粘性末端 Hind Ⅱ GTCGAC CAGCTG 平端切口