Co-IPLC-MS高通量蛋白质相互作用分析-上海易算生物科技有限公司.PDF

上海易算生物科技有限公司 Co-IP+LC-MS ：高通量蛋白质相互作用分析 marketing@ 目录 1. CO-IP+LC-MS ：高通量蛋白质相互作用分析 2 1.1 背景介绍 2 1.2 技术路线 2 2. SILAC 细胞蛋白质表达差异谱定量分析 3 2.1 背景介绍 3 2.2 技术路线 4 3. SILAM ：模式生物SILAC 蛋白质差异表达谱分析 4 3.1 背景介绍 4 3.2 技术路线 5 4. SUPER-SILAC ：人体组织样本SILAC 蛋白质表达差异谱分析 5 4.1 背景介绍 5 4.2 技术路线 6 5. SILAC + CO-IP + LC-MS ：蛋白质相互作用定量分析 6 5.1 背景介绍 6 5.2 技术路线 7 1 1. Co-IP+LC-MS ：高通量蛋白质相互作用分析 1.1 背景介绍  蛋白质是细胞的功能分子 ，通过实时、动态、交互式的蛋白质相互作用网络(Protein-Protein Interaction network, PPIs), 以实现细胞对外界不同刺激的应答。  免疫共沉淀(Co-IP)和 pull-down 技术是研究蛋白质相互作用的经典方法。传统的 Co-IP/pull-down 结合Western Blot (WB)通常只能一次确认一对相互作用。然而，在细胞中，一个蛋白质往往是和多个蛋白质相互作用，形成相互作用复合 物(Protein Complex) ，以实现特定的生理功能。传统的 Co-IP/pull-down + WB 无法实现对蛋白质复合物的鉴定。  将 Co-IP/ pull-down 技术与 LC-MS 为基础的蛋白质组学技术结合，通过一次实验，能高通量的鉴定和筛选到多个与要 研究的目的蛋白 （bait ）存在相互作用的蛋白质 （蛋白质复合物组分 ）, 从而拥有属于自己的专属蛋白质相互作用数据 库，通过深入的生物学分析，能发表多篇连续性的学术文章。 1.2 技术路线 2 2. SILAC 细胞蛋白质表达差异谱定量分析 2.1 背景介绍  氨基酸是蛋白质合成的基本元件。Lys(K)、Arg(R)是哺乳动物细胞的“必需氨基酸”，须在培养基中添加 K 和 R ，便于 12 12 细胞进行蛋白质合成，促进细胞增殖。天然的 K 和 R 分子中 ，都含有 6 个 C 原子 ，这些 C 原子全部是 C （ C -K、 6 12 12 13 13 13 13 13 C -R ) 。将普通 K 和 R 中的 6 个 C 原子全部用 C 取代 ，则生成 C 标记的 K 和 R ( C -K、 C -R)。 C -K 和 6 6 6 6 13 12 1