从混合线虫样品和植物组织中直接检测香蕉穿孔线虫的-中国农业科学.PDF

中国农业科学 2011,44(19):3991-3998 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.19.008 从混合线虫样品和植物组织中直接检测 香蕉穿孔线虫的 ITS-PCR 方法 刘一帆，徐春玲，张 超，苏秀敏, 谢 辉 （华南农业大学资源环境学院植物线虫研究室/华南农业大学植物检疫线虫检测与防疫研究中心，广州510642 ） 摘要：【目的】建立直接从多种线虫混合样品以及香蕉和红掌根组织中检测鉴定香蕉穿孔线虫的PCR 方法。 【方法】使用Primer Premier 5.0 在香蕉穿孔线虫的ITS 区设计1 对特异性引物，运用PCR 技术对目的线虫DNA 进行特异性检测。【结果】通过对 17 种24 个种群线虫的检测表明，所设计的引物只能从香蕉穿孔线虫种群中特 异扩增出rDNA-ITS 片段，产物大小为518 bp。利用该特异引物以及建立的DNA 提取方法和PCR 体系，可以直接 从香蕉穿孔线虫与短体线虫、螺旋线虫、肾状线虫、根结线虫、茎线虫、矮化线虫、纽带线虫、丝尾垫刃线虫、 滑刃线虫和小杆线虫混合样品中特异扩增出目的线虫的rDNA-ITS 片段，并可以分别从混合有不少于3 条香蕉穿孔 线虫的2 cm 香蕉或红掌根组织（约0.1 g）中特异检测出目的线虫的DNA 片段。【结论】本研究设计的特异性引 物以及建立的DNA 提取方法和PCR 体系可直接从多种线虫混合的样品以及香蕉和红掌根组织中快速检测鉴定出香 蕉穿孔线虫。 关键词：香蕉穿孔线虫；ITS 区特异引物；混合线虫样品；植物组织；PCR 检测 Direct PCR Detection of Radopholus similis from Plant Tissues and Mixed Sample of Nematodes by ITS Specific Primers LIU Yi-fan, XU Chun-ling, ZHANG Chao, SU Xiu-min, XIE Hui (Laboratory of Plant Nematology, College of Natural Resource and Environment, South China Agricultural University/Research Center of Nematodes of Plant Quarantine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642) Abstract: 【Objective 】 The objective of this study is to build an ITS-PCR (internal transcribed spacer-polymerase chain reaction) method for detecting Radopholus similis (Cobb) Thorne from mixtures of different nematodes, or tissues of Musa spp. and Anthurium andraeanum. 【Method 】 A specific primer pair was designed according to ITS region of rDNA from R. similis using Primer Premier 5.0. A single-step PCR method was used to specially detect the target ITS-rDNA of R. similis . 【Result 】 The specificity of the designed primers was confirmed that a 518 bp PCR produc