现场调查血液样品采集和保存标准.doc

现场调查血液样品采集和保存标准 血样的保存与管理： 1．血样采集过程中，必须征得提供者的同意,不对提供者造成不必要的损伤。 2．血样的保存须根据其类型的不同采用合适的方式,以将损失减少到最低为原则。 3．由于来源珍贵，应当有专人对血液样品进行保存及管理，血液样品的保存应该有专用的空间及相应的设备，保证血液样品的安全可用。 具体标准 1、采血管：采购质量可靠的5ml真空塑料采血管，抗凝剂为EDTA-/K2采血管应符合中华人民共和国卫生行业标准《真空采血管和添加剂》（WS/T 224-2002）。采样编号：为配合样品管理，采集的样品编号全部采用以个体序号进行标注，打印纸要耐磨、在低温(-80)和高温(90)下粘贴牢固，且防水、防潮，纸的大小规格控制在 cm×3 cm，便于粘贴。粘贴采样编号时要注意方向，应使打印纸与采血管平行，避免“螺旋粘贴”情况的出现。纸一式三份，一份贴在表，另外两份分别粘贴于支采血管。采样编号编制规则从0001开始编制血样采集 1样品采集时，每管采集ml、每人采集管。 2采集后的样品如能在24小时内运送至指定检测实验室，可以采用常温保存；如在三日之内运送，则应迅速存放到4℃冰箱保存。 3样品运送过程中，包装箱内应放置足够的冰冻好的蓄冷剂，确保样品的低温运输。运送样品前，对样品进行认真清点首先确定被研究对象，受试者必须确定在基本相同的生活区域内（如必须为中国四川凉山地区汉族人群） 2. 受试者必须在知情同意的前提下，统一对其进行身高、体重 、血压、 心率、血糖、血脂（包括：血清总甘油三酯（TG）、血清总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL））等指标的检测，并进行记录。 3.5分钟后，从肘静脉抽血5毫升，装入10毫升采心管中，经1％EDTA溶液进行抗凝处理后，(2500r/ min) 。血浆和血凝块均在- 40℃保存。待标本收集完备后提取DNA。最后－40冰箱冻存待用。 附件 血液中提取DNA样本预处理： 1. 吸取2ml全血样本加入15ml离心管中添加3ml CLvortex混匀15s2000×g 离心5min弃上清2. 在上述离心管中添加 2ml CL vortex混匀15s2000×g离心5min弃上清细胞裂解蛋白变性： 3. 配制FG:PK=100:1工作液4. 每个标本加入1ml FGPK 工作液立刻涡旋混匀5. 65℃水浴30min其间颠倒混匀数次沉淀核酸： 6. 添加1ml异丙醇颠倒充分混匀至出现丝状或簇状基因组DNA。 7. 离心2000×g 离心3 分钟,倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上确保沉淀在管中8. 加入2ml 70%乙醇涡旋振荡5 秒钟2000×g 离心3 分钟弃上清9. 倒弃上清将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少5分钟确保沉淀在管中10. 重复步骤811. 空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净（至少5分钟核酸溶解： 12. 加入200－300μl洗脱缓冲液TB低速涡旋5秒65℃加热10分钟~1小时溶解DNA其间轻弹数次助溶如果血液保存时间超过半年，可以重复步骤2，以保障更充分的样本预处理。FGPK现用现配，配置好的溶液必须1h之内使用。 3当处理多个样品时加入缓冲液FG和蛋白酶K的混合液后要立刻涡旋混匀不要等所有的样品加完后再涡旋振荡。 5