生化产品原理基础.ppt

单试剂单波长 反应度R= t3时刻吸光度—单试剂空白吸光度 双试剂单波长 R=t4时刻吸光度—双试剂空白吸光度；（反应起始时间设置为0） R=t4时刻吸光度—双试剂空白吸光度— t3前一时刻的吸光度×体积校正因数；（反应起始时间设置为0） 指反应速度与被反应物（底物）的浓度无关，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度（△A/min）与被测物（催化剂）的活性或浓度成正比。零级动力学法即通常所说的动力学法，也被称为连续监测法；主要用于酶活性的测定。 反应度的计算 一级动力学法（两点法、固定时间法）是指在被测物参与反应的条件下，在一定的反应时间内，反应速度与反应物浓度的一次方成正比，由于反应物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加（或降低）速度越来越小，由于这类反应达到平衡的时间很长，且平衡常数不算很大，必需在特定时间段内进行监测，该段时间内吸光度的增加（或）降低与被测定物的浓度成正比 定标表示了反应度和浓度的关系。 0 1 2 3 4 mol/L R 。 。 。 。 * 80 60 40 20 C 定标分成两大类：线性定标和非线性定标 线性定标又包括单点线性定标（又称因数法）、两点线性定标（又称线性法）和多点（大于3点）线性定标（又称线性回归法），适用于比色法测定的项目。 非线性定标主要包括Logistic-Log 4P、Logistic-Log 5P、Exponential5P、Polynomial5P、Parabola和 Spline，适用于比浊法测定的项目。 定标公式：R=KC，只有1个定标参数K K= R标/C标 只需提供1个标准品。 定标公式：R=KC+b，有2个定标参数，K和b， 其中， 要求提供2个标准品，C1、C2为标准品1和2的浓度，R1、R2为标准品1和2的反应度。 定标公式： 有4个参数，即R0、K、a和b。 要求提供至少4个标准品，其中第1个标准品的浓度（活性）为零，其对应的R就等于R0，用最速下降法+拟牛顿法求解。适用于随着浓度增加，其反应度增加越来越小的定标曲线 定标公式： ，有5个参数，即R0、K、a、b和c。 要求提供至少5个标准品，其中第1个标准品的浓度(活性)为零，其对应的R就等于R0，用最速下降法+拟牛顿法求解。适用于浓度增加到一定程度后，其反应度增加越来越大的定标曲线 。 定标公式：C-Ci=R0i+ai(C-Ci)+bi(C-Ci)2+ci(C-Ci)3-R有4i个参数，即R0i、ai、bi和ci。 要求提供2-6个标准品，用最速下降法+拟牛顿法求解。由于是分段拟和，其拟和程度在所有定标类型中最高。 某溶液的吸光度等于该物质的吸光系数ε（摩尔吸光系数 Molar Absorptivity ）、浓度C和光径L（cm）的乘积，当光径不变时，浓度和吸光度成正比。 即A= ε CL 0 1 2 3 4 mg/ml A 。 。 。 。 * 0.8 0.6 0.4 0.2 0 带有小粒的悬浮液和胶体溶液都具有向四面八方散射入射光的性质，当一束平行光通过含有悬浮质点的悬浮液或胶体溶液时，同时受到散射和吸收两个因素的影响，使光的强度减弱。在光源的光路方向上测量透射光（实际上还包括散射光）强度与入射光强度比值，并通过该比值测定出悬浮液或胶体溶液中质点的溶度，称为透射比浊法。 一束强度为Io的平行单色光通过一个含有悬浮质点(颗粒大小与光源波长接近)的悬浮液或胶体溶液时，其透射光强度I可用下式表示： I=IoeιL 上式中，L为悬浮液或胶体溶液在光前进方向上的长度，τ为浊度系数，与悬浮质点的浓度C成线性关系。令τ=2.3KC，则：Lg(Io/I)=KCL 1、吸收光谱法和比浊法。 2、生化仪是检测吸光度A的。 在测定前向血清中加入适当的显色剂（试剂），与待测成分的化学反应使溶液变色即可测定此待测成分。 不同的试剂和血清中的不同成分反应，引起了吸光度的变化 试剂有NAD+-NADH（NADP+-NADPH）系统、 p-NP（p-NA）系统、 H2O2偶联的指示系统、抗原抗体反应指示系统和其它显色反应 NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而NAD+和NADP+在340nm无吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB