生物大分子的性质.doc

实验一 生物大分子的性质 （糖类的颜色反应；糖类的还原作用；蛋白质的沉淀反应） 一、目的 了解糖类某些颜色反应的原理；鉴别糖的方法；鉴别糖还原性的原理和方法；了解沉淀蛋白质的几种方法。 二、原理 α-萘酚反应 间苯二酚反应 斐林试剂和本尼迪克试剂鉴别糖的还原性 蛋白质因为失去电荷和脱水而产生的沉淀反应 三、操作步骤 糖类的颜色反应 糖类的还原作用 蛋白质的沉淀反应 实验二 总糖的测定——蒽酮比色法 一、目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 二、原理 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，与蒽酮生成兰色物质。在一定范围内，还原糖的量与兰色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在620nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中总糖的含量。三、操作步骤 1． 制作葡萄糖标准曲线 取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和蒽酮试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调波长620nm，用0号管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。 2． 测定样品的吸光值，并根据吸光值，从标准曲线上面查出样品中总糖的含量。 实验三 脂肪碘值的测定 一、目的 掌握测定脂肪碘值的原理和操作方法，了解测定脂肪碘值的意义。 二、原理 不饱和脂肪酸碳链上含有不饱和键，可与卤素（Cl2，Br2，I2）进行加成反应。不饱和键数目越多，加成的卤素量也越多，通常以“碘值”表示。在一定条件下，每100g脂肪所吸收碘的克数称为该脂肪的“碘值”。碘值越高，表明不饱和脂肪酸的含量越高，它是鉴定和鉴别油脂的一个重要常数。 碘与脂肪的加成反应很慢，而氯及溴与脂肪的加成反应快，但常有取代和氧化等副反应。本实验使用IBr进行碘值的测定，这种试剂稳定，测定的结果接近理论值。溴化碘(IBr)的一部分与油脂的不饱和脂肪酸起加成作用，剩余部分与碘化钾作用放出碘，放出的碘用硫代硫酸钠滴定。 加成反应： 释放碘： IBr + KI= KBr+I2 滴定： I2 + 2NaS2O3 = NaI + Na2S4O6 实验时取样多少决定于油脂样品的碘值。 三、操作步骤 准确称取0.3～0.4g花生油2份，置于两个干燥的碘瓶内，切勿使油粘在瓶颈或壁上。加入10mL四氯化碳，轻轻摇动，使油全部溶解。用滴定管仔细地加入25mL溴化碘溶液，勿使溶液接触瓶颈，塞好瓶塞，在玻璃塞与瓶口之间加数滴10％碘化钾溶液封闭缝隙，以免碘的挥发损失。在20～30℃暗处放置30min，并不时轻轻摇动。油吸收的碘量不应超过溴化碘溶液所含之碘量的一半，若瓶内混合物的颜色很浅，表示花生油用量过多，改称较少量花生油，重作。 放置30min后，立刻小心地打开玻璃塞，使塞旁碘化钾溶液流入瓶内，切勿丢失。用新配制的10％碘化钾10 mL和蒸馏水50mL把玻璃塞和瓶颈上的液体冲洗入瓶内，混匀。用0.1mol／L硫代硫酸钠溶液迅速滴定至浅黄色。加入1％淀粉溶液约1mL，继续滴定，将近终点时，用力振荡，使碘由四氯化碳全部进入水溶液内。再滴定至蓝色消失为止，即达滴定终点。 另作2份空白对照，除不加油样品外，其余操作同上。滴定后，将废液倒入废液缸内，以便回收四氯化碳。计算碘值。 实验四 甲醛测定法测定氨基氮 一、目的 掌握甲醛测定法测定氨基酸含量的原理和操作方法 二、原理 氨基酸是两性电解质，是弱酸，完全解离是的PH为11~12或更高，无指示剂来准确的显色。常温下，甲醛能迅速和氨基酸的氨基结合，使酚酞指示剂在PH=9左右显色，从而可以测定氨基酸的含量。 三、操作步骤 1．加样 取3个锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加2mlGly溶液2ml和5ml水，混匀。向3号瓶内加入7ml水。然后向3个瓶内各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加入2ml甲醛溶液，再混匀。 2．滴定 对3个锥形瓶分别用标准NaOH溶液进行滴定，滴定终点为溶液显微红色。再平行做几份实验，取平均值。 3．计算 实验五 纸层析 一、目的 学习纤维素薄层层析的操作方法，掌握分配层析的原理。 二、原理 以纤维素作为支持物，把它均匀地涂布在玻璃板上成一薄层，然后在此薄层上进行层析即为纤维素薄层层析。纤维素是一种惰性支持物，它与水有较强的亲和力而与有机溶剂亲和力较弱。层析时吸着在纤维素上的水是固定相，而展层溶剂是流动相。当欲被分离的各种物质在固定相和流动相中的分配系数不同时，它们就能被分离开。 三、操作步骤 1．点样 在纸板上距一